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目的1999年ROSS提出动脉粥样硬化是一种慢性炎症疾病,它的形成是血管内皮细胞、单核细胞、血管平滑肌细胞与炎症介质相互作用的结果,以粥样斑块中出现单核细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞为特征。血管内皮细胞在动脉粥样硬化的发生发展过程中具有重要作用。血管内皮细胞直接接触血液,血液中的异常物质可直接影响内皮细胞,如ox-LDL等。血管内皮细胞受到刺激后,可分泌多种细胞因子,促进白细胞粘附、血管平滑肌细胞增殖及迁移等。Tribbles是在果蝇体内发现一种抑制有丝分裂的蛋白激酶,也称为神经细胞死亡诱导蛋白激酶(SINK)。在哺乳动物体内有三种TRBs基因家族成员:TrbI,Trb2,Trb3。Tribbles蛋白拥有一个相同的中心区,以及70-100个氨基酸残基的氮末端和25个残基的碳末端区。此中心区是一个类似丝氨酸一苏氨酸蛋白激酶,但缺乏赖氨酸活性位点的区域,因而具有激酶活性调控作用,可调节MAPK上游MAPKK的表达,从而调节MAPK的磷酸化,而MAPK可与转录因子NF-κB和AP-1等的表达有关。脂多糖为经典的炎症刺激物,是实验中最常用的炎症刺激因子。脂多糖可激活内皮细胞,促使NO、氧自由基、趋化因子、细胞因子、前列腺素等的表达,这些炎症因子通过自分泌或旁分泌等途径促使细胞损伤,内皮细胞间隙增大,血管基膜暴露,中性粒细胞和单核细胞等迁移内皮下,致使损伤加剧。脂多糖可通过TLR-4激活血管内皮细胞中MAPKs及NF-κB等信号传导途径。他汀类(statins)药物属于3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-CoA)抑制剂,可以降低血清胆固醇的含量,是治疗动脉粥样硬化的常用药。越来越多的研究表明,他汀类药物不仅具有降脂作用,还具有抗炎作用,其抗炎作用主要通过抑制NF-κB途径实现。本实验应用脂多糖作为炎症刺激物,辛伐他汀作为保护药物,观察Tribbles在脂多糖激活的人脐静脉内皮细胞中的mRNA表达变化以及辛伐他汀对其表达的影响。方法1.细胞培养:取新鲜脐带,分离人脐静脉内皮细胞,培养,鉴定,传代,第2-3代的细胞用来实验。2.细胞分组:将细胞随机分成12h、24h两组,每组又分为:①对照组;②脂多糖组(100ng/mL);③辛伐他汀组(5μg/mL);④脂多糖与辛伐他汀共作用组。吸去细胞上清液后将细胞冻存在-80℃留做荧光实时定量PCR检测。3.收集细胞,分别抽取mRNA,反转录cDNA,进行荧光实时定量PCR检测IL-6、TNF-α、Trb1、Trb2及Trb3的mRNA表达,记录结果。4.上述实验重复6次,并用统计学分析软件进行统计分析。结果1.人脐静脉内皮细胞鉴定结果:形态学鉴定,相差显微镜下,内皮细胞分布均匀,单层生长,形态为多角形,鹅卵石状镶嵌排列;内皮细胞Ⅷ因子相关抗原SABC法检测鉴定,相差显微镜下,内皮细胞胞浆中可见棕黄色颗粒,鉴定结果为人脐静脉内皮细胞。2.实时定量PCR结果:与对照组相比,脂多糖组IL-6、TNF-α、Trb1及Trb3的mRNA表达明显增强(P＜0.05);与脂多糖组相比,脂多糖与辛伐他汀共作用组IL-6、TNF-α、Trb1及Trb3的mRNA表达明显减少(P＜0.05)。结论1.脂多糖可以诱导人脐静脉内皮细胞IL-6、TNF-α、Trb1及Trb3的mRNA表达增加。2.辛伐他汀可以抑制由脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞IL-6、TNF-α、Trb1及Trb3的mRNA表达。3.Trb1及Trb3可促进脂多糖刺激的HUVEC的凋亡。