研究背景：　　马尔尼菲青霉菌病(PenicilliosisMameffei,PSM)是由马尔尼菲青霉菌(PenicilliumMarneffei,PM)感染引起的机会性真菌性疾病，多见于艾滋病（Acquiredimmunodeficiencysyndrome,AIDS）以及其他原因引起免疫力低下的患者。近年来，随着AIDS发病率的上升，播散性PSM的发病率也逐年上升。而且，由于该病缺乏特征性临床表现，病原培养需5~14天，导致早期诊断较为困难，病死率高达10~20％。CD4+T淋巴细胞计数是反映AIDS患者免疫系统损害状况最明确的指标，当CD4+计数小于100cells/ul，AIDS患者容易罹患播散性PSM。然而，临床观察中发现，在同一地区同一季节，年龄、性别、CD4+T淋巴细胞计数等情况相仿的AIDS患者，有些感染PM发病，另一些却始终都不感染PM，这提示宿主的遗传因素可能在其中发挥重要作用。越来越多研究发现，宿主的模式识别受体（Patternrecognitionreceptors,PRRs）基因多态性与其罹患侵袭性真菌感染（Invasivefungalinfections，IFIs）紧密相关。Toll样受体(Tolllikereceptor,TLR)是PRRs至关重要部分，可以识别病原相关分子模式（Pathogenassociatedmolecularpattern,PAMPs），激活一系列炎症反应，发挥抗真菌天然免疫作用。其中，TLR成员TLR2、TLR4及TLR9等的单核苷酸多态性（Singlenucleotidepolymorphisms,SNPs），被证实与宿主感染多种致病真菌，例如：白色念珠菌，曲霉菌的易感性相关，但与AIDS患者罹患PM感染的关系知之甚少。本研究针对中国汉族人群，了解AIDS患者TLR2、TLR4及TLR9基因的SNPs，探讨上述TLR的基因多态性与AIDS患者感染PM易感性的关系，为进一步从宿主遗传水平阐释宿主与PM的相互作用机制奠定基础。　　目的：　　1.了解中国汉族人群AIDS患者TLR2、TLR4及TLR9基因的SNPs。　　2.探讨TLR2、TLR4及TLR9基因多态性与AIDS患者感染PM易感性的关系，旨于发现我国AIDS人群TLR的PM易感基因型及其单体型。　　方法：　　1.研究对象：　　所有研究对象均为在广东居住超过一年的中国汉族人，年龄19~80岁。病例组为2008-2015年间广州市第八人民医院（简称：八院）诊治的AIDS合并PSM患者200例（PSM组），所有患者均经病原学和/或病理学确诊PM感染；对照组为同时间段八院收治的无PSM及其他IFIs的AIDS患者200例（Non-PSM组），与PSM组在性别、年龄以及CD4+T淋巴细胞数水平方面1:1匹配。同时，以76例健康体检者（健康组）作为健康对照。PSM组患者根据其病情严重程度，分为典型PSM组和重型PSM组。本研究已获得我院伦理委员会的批准和受试者知情同意。　　2.TLR2、TLR4及TLR9基因与PM易感性相关SNPs位点的筛选：　　随机筛选PSM组20例及Non-PSM组20例。PSM组男性18例，女性2例。采用一代直接测序方法，检测TLR2、TLR4及TLR9基因编码区（Codingsequence，CDS），应用matlab软件分析两组之间等位基因频率的差异，筛选可能与PM易感性相关的SNPs位点。同时，应用生物信息学分析，寻找既往文献报道的TLR2、TLR4及TLR9与感染性疾病易感性相关的SNP位点。将上述两种方法获得的SNP位点作为大样本验证的备选位点。　　3.TLR2、TLR4及TLR9基因备选SNPs位点的大样本检测：　　利用飞行时间质谱技术，检测200例PSM组、200例Non-PSM组及76例健康组备选SNPs位点的基因型及其频率。使用Hardy-Weinberg遗传平衡定律（Hardy-WeinbergEquilibrium，HWE）检验基因型频率是否达到遗传平衡。　　4.TLR2、TLR4及TLR9基因SNPs与AIDS患者PM易感性的相关性分析　　所有资料均通过MicresoftExcel软件录入，应用SPSS13.0软件包对数据进行统计分析，应用plink软件进行连锁不平衡分析及单体型分析。采用以卡方检验或Fishers精确检验，对各组的性别、年龄、CD4+T淋巴细胞计数、合并机会性感染或其他感染以及各基因型和等位基因频率的分布进行分析；对于多个样本率的多重比较采用Bonferroni法对检验水准进行校正，即将原来设定的检验水准除以检验次数，得到实际用于确定统计学意义的检验水准。P<0.05具有统计学差异。　　结果：　　1.PSM组患者临床特点分析：　　200例AIDS合并PSM患者中，男性160例，女性40例，平均年龄（37.8±9.9）岁。临床表现主要包括：发热（98.0%）、咳嗽（76.0%）、咳痰（65.0%）、气促（31.0%）、纳差（66.0%）、体重下降（57.5%）、贫血（96.0%）、皮疹（53.0%）、肝大（57.0%）、脾大（64.5%）、淋巴结肿大（31.0%）等。肺部CT异常者105例（52.5%），平均CD4+T淋巴细胞（17.0±17.4）cells/ul。188例（94%）治愈或好转出院，6例未愈自动出院，6例死亡。根据病情程度分型：134例典型PSM，66例重型PSM。　　2.PSM组、Non-PSM组及健康组一般临床资料的比较：　　Non-PSM200例，其中男性163例，女性37例，患者中位年龄39.5岁（19～77岁），患者CD4+T淋巴细胞计数为0～84cells/ul，平均为（20.2±17.3）cells/ul；健康组76例，其中男53例，女23例，中位年龄38.6岁（21～78岁）。三组研究对象的性别与年龄构成无明显差异（χ2=4.486，P=0.11；χ2=2.591，P=0.63）。PSM组与对照组患者的CD4+T细胞计数相仿，差异无统计学意义(χ2=0.046，P=0.83)。典型PSM组与其匹配的Non-PSM患者，在性别比例、年龄及CD4+淋巴细胞计数方面均无明显差异（χ2=0.240，P=0.62；χ2=0.217，P=0.90；χ2=0.052，P=0.82）；重型PSM组与其匹配的Non-PSM患者，在性别比例、年龄及CD4+淋巴细胞计数方面也无明显差异（χ2=0，P=1；χ2=3.415，P=0.07；χ2=0.341，P=0.56）。　　3.TLR2、TLR4及TLR9基因与PM易感性相关SNPs位点的筛选结果：　　通过小样本DNA测序，在TLR2、TLR4、TLR9CDS区共发现有意义的5个变异位点：TLR2chr4:154624656，TLR4chr9:120476274，TLR4chr9:120475826，TLR4chr9:120476612，以及TLR4chr9:120475697，其等位基因频率在PSM组与Non-PSM组之间的差异均有统计学意义（P值均<0.05）。同时，又从既往文献报道中发现23个可能与感染性疾病易感性相关的SNP位点（不与小样本DNA测序筛选获得的位点重复）：TLR2有9个，TLR4有12个，TLR9有2个。共获得28个可能与AIDS患者PM易感性相关的备选SNP位点。　　4.TLR2、TLR4及TLR9基因备选SNPs位点大样本检测结果：　　所有备选SNP位点都获得成功测序，在PSM组、Non-PSM组及健康组中，除TLR4(rs10116253、rs7037117)不符合HWE平衡定律(P<0.05)外，其余位点均符合HWE平衡定律（P>0.05）。　　5.TLR2、TLR4及TLR9基因SNPs与AIDS患者PM易感性的相关性：　　28个备选SNP位点中，共发现2个位点可能与AIDS患者PM易感性相关：⑴TLR2rs1339的基因型频率与等位基因频率：PSM组、Non-PSM组及健康组三组间比较及重型PSM组与其对照组比较均无统计学差异（P≥0.05），但典型PSM组与其对照组比较，差异存在统计学意义（χ2=6.761，P=0.03；χ2=6.907，P=0.009）；⑵TLR2rs7656411的基因型频率与等位基因频率：三组间比较及典型PSM组与其对照组比较均无统计学差异（P≥0.05），但重型PSM组的基因型频率与其对照组比较，差异具有统计学意义（χ2=8.386，P=0.02，<0.05），重型PSM组57.8%患者具有基因型GT，而其对照组仅35.4%患者拥有基因型GT。　　结论：　　1.TLR2rs1339及rs7656411位点的基因多态性可能与AIDS患者感染PM的易感性相关，rs7656411的基因型GT可能系AIDS患者罹患重型PSM的易感基因型。这是国内外首次对宿主TLR基因多态性与PM易感性相关的研究报道。　　2.本研究未发现与AIDS患者感染PM易感性相关的TLR4和TLR9的SNPs位点，可扩大样本量或增加SNPs位点以进一步证实。