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目的:七氟醚(Sevoflurane)是一种新型的卤族吸入麻醉药,目前已较广泛地应用于临床麻醉的多个领域,是一种较为安全理想的吸入麻醉药物。树突状细胞(Dendritic cells,DC)是机体功能最强的抗原递呈细胞(Antigen presenting cells,APC),它分为未成熟型DC(imDCs)和成熟型DC(mDCs),后者能表达高水平MHC分子(主要组织相容性复合体)、共刺激因子及某些粘附因子,能有效激活初始型T细胞,处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节。本实验旨在观察不同浓度七氟醚对mDCs作用相同时间后,对mDCs细胞形态、细胞表面免疫表型及功能的影响,进一步探讨不同浓度七氟醚对mDCs启动特异性免疫应答的影响。方法:无菌条件下采集健康孕妇正常新生儿脐带血70ml左右,肝素抗凝。在超净工作台中用生理盐水:脐带血为1:1比例稀释后,再按照稀释血:淋巴细胞分离液以2:1的比例缓缓加到淋巴细胞分离液上层,密度梯度离心法获得脐血单个核细胞(CBMC)。将CBMC用生理盐水清洗3次后弃上清,加入无血清培养基重悬并计数CBMC,调整CBMC密度为2×106/ml,接种于6孔培养板的一孔内,容积为3ml。在37℃、5%CO2培养箱中孵育2h,移去悬浮细胞。无血清培养基轻轻洗涤两次,去除残留非贴壁细胞,保留贴壁细胞,调整细胞终浓度为1×106/ml。在PBMC中加入细胞生长因子:重组人类粒细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)50ng/ml,人类白介素–4(rhIL-4)10ng/ml。然后随机分组:常规培养组作为对照组(N组)、4%的七氟醚处理组(A组)、6%的七氟醚处理组(B组)、8%的七氟醚处理组(C组)。各组均常规加入rhGM-CS、rhIL-4及重组人类肿瘤坏死因子–α(rhTNF-α)培养14d成为mDCs。A组、B组和C组在第14天分别用4%、6%、8%浓度的七氟醚处理2小时,N组作为对照不做处理。培养过程中在倒置显微镜下观察DC生长情况及形态学变化。第15天收集mDCs用流式细胞分析仪分析各组mDCs免疫表型CD80、CD86、CD83、HLA–DR(MHC-Ⅱ类分子之一)分子的表达;并收集各组细胞培养上清液用双抗体夹心免疫(ELISA)法测定IL–12的浓度。同上述方法制备外周血CBMC,加入含有10%小牛血清的RPMI1640培养液,在培养箱中培养2h,收集悬浮细胞培养24h即为脐血来源的淋巴细胞,调整细胞浓度为1.0×106 /ml,作为同种异体混合淋巴细胞反应实验中的反应细胞,以培养至第15d的各组mDCs作为刺激细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测mDCs刺激混合淋巴细胞的增殖能力。结果:1:七氟醚对mDCs细胞形态结构的影响:与N组相比,A组、B组和C组细胞形态无明显变化,仍然具有mDCs的典型特征,扫描电镜观察细胞表面形态也无明显改变;透射电镜下,A组、B组和C组与对照N组比较,细胞内部结构无显著变化。2:七氟醚对mDCs免疫表型表达率的影响:各组mDCs表面CD80/CD86、CD83/HLA–DR表达率检测结果均数如下:N组分别为40.72±7.74%,21.92±4.39%;A组分别为43.07±7.59%,20.64±7.26%;B组分别为47.72±6.54%,21.59±2.15%;C组分别为39.04±1.69%;27.16±8.79%。与N组比较,A组、B组、C组mDCs表面表型CD80/CD86、CD83/HLA–DR表达无明显变化(P>0.05)。3:七氟醚对mDCs分泌IL-12的影响:各组mDCs分泌IL-12检测结果均数如下:N组为843.89±235.57 pg/ml;A组为808.62±495.82 pg/ml;B组为1396.11±293.29 pg/ml;C组为1282.38±400.58 pg/ml。A组、B组、C组mDCs分泌IL-12的浓度与N组相比无明显差异(P>0.05)。4:七氟醚处理后树突状细胞刺激混合淋巴细胞增殖反应的影响:A组、B组和C组mDCs刺激混合淋巴细胞增殖反应与N组比较无明显差异(P>0.05)。结论:与临床应用相关的不同浓度七氟醚的对人脐血来源mDCs的形态结构功能及细胞表面免疫表型均无明显影响;与临床应用相关的不同浓度七氟醚对mDCs介导的细胞免疫的启动这一环节没有直接的影响。