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目的:(1)明确TGF—β1对晶状体上皮细胞增殖的影响。(2)明确体外培养晶状体上皮细胞是否存在基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases, MMPs)表达。(3)研究TGF—β1对晶状体上皮细胞MMPs表达的影响。 方法:(1)原代培养牛晶状体上皮细胞并传代,酶谱法检测原代、1代、2代、3代细胞培养液中MMPs活性。(2)原代细胞长满融合后,传入96孔板(10~4/孔),分别使用含不同浓度TGF—β1(终浓度为0.1、1、10ng/ml)的5%小牛血清培养液培养,对照组用加入等体积蒸馏水的的5%小牛血清培养液培养。24小时后收集细胞培养液,酶谱法检测MMPs活性。细胞用血细胞计数板法进行细胞计数。(3)1代牛晶状体上皮细胞用含10ng/ml TGF-β1的5%小牛血清培养液培养,12、24、36、48、72小时后分别收集培养液,酶谱法检测MMPs活性。细胞用血细胞计数板法进行细胞计数。对照组为加入等体积蒸馏水的5%小牛血清培养液培养的牛晶状体上皮细胞。 结果:(1)细胞计数结果:0.1、1、10ng/ml的TGF-β1作用24小时后细胞数分别为:1.65±0.12、1.4±0.15、1.34±0.22、1.3±0.17×10~4个/孔。对照组为:1.65±0.12×10~4个/孔。10ng/ml的TGF-β1作用12、24、36、48、72小时后细胞计数:1.04±0.10、1.29±0.17、1.30±0.15、1.47±0.22、1.56±0.26×10~4个/孔,对照组12、24、36、48、72小时细胞计数:1.32±0.13、1.65±0.12、1.75±0.16、1.85±0.16、2.36±0.16×10~4个/孔;(2)体外培养的原代、1代、2代、3代细胞培养液中均未检测到MMPs活性。(3)加入TGF-β1后细胞培养液中均检测到MMPs活性,分别为MMP-2(明胶酶A)和MMP-9(明胶酶B)。浓度为0.1、1、10ng/ml的TGF-β1作用24小时后,每10~4个细胞分泌的MMP-2活性分别为:699.79±60.77、870.20±46.45、989.50±98.44,MMP-9活性为:171.28±17.33、233.91±25.49、279.6±15.52。对照组未检测到MMP-2及MMP-9活性。(4)加入TGF-β1(终浓度10ng/ml)12、24、36、48、72小时后,两种明胶酶活性随时问呈上升趋势。MMP-2不同时间点的活性为:730±31.37,990±110.0,1102.2±46.42,1272.8±25.08,1639.2±39.69;MMP-9不同时间点的活性为:227.2±21.65,279.6±15.52,346.6±36.07,510.8±62.83,679.4±108。对照组未检测到MMP-2及MMP-9活性。 结论:(1)TGF-β1抑制牛晶状体上皮细胞的增殖。(2)正常牛晶状体上皮细胞不表竖南大学硕卜学位沦文l巧F一p诱分品状体}一皮细胞基质金属蛋白酶表达的实验研究达M人」ps活性。(3)TGF一pl能够诱导牛晶状体上皮细胞表达明胶酶活性,且明胶酶活性呈时间一浓度依赖性。