三磷酸腺苷联合BMSCs移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究

来源 :兰州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhang504752895
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目的:三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)能促进脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)的修复,通过观察ATP联合骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)移植治疗大鼠SCI的疗效,探讨两者在SCI修复中的协同作用及其联合移植治疗SCI的可行性。方法:取1只体重为120 g的雄性SD大鼠的股骨和胫骨骨髓,分离、培养获得BMSCs。将第3代细胞BrdU标记,制备浓度为5.0×107个/mL的细胞悬液。将48只体重240~260 g的SD雌性大鼠,采用改良Allen’s打击法制备T11~13节段SCI模型后,随机分为4组,每组12只。联合移植组(A组):将ATP(40mg/kg)与6μl BMSCs细胞悬液混匀后,注射至损伤脊髓撞击中央及距头、尾侧各1 mm处,细胞数量约3.0×105个;BMSCs移植组(B组)、ATP移植组(C组)及对照组(D组):同A组方法分别移植BMSCs细胞悬液6μl、ATP(40 mg/kg)及PBS(40 mg/kg).术后观察大鼠一般情况,于1、3、7、14、28 d采用Rivilin斜板实验及Tarlov评分评价后肢功能恢复程度;28 d处死后取材行组织学和免疫组织化学染色观察脊髓损伤修复情况。结果:术后A组1只、B、C组各2只、D组3只动物因感染和厌食而死亡,其余动物均存活至实验完成。各组动物术后均出现后肢瘫痪症状,术后1-2周开始有不同程度恢复,A组最快,B、C组次之,D组最差。改良Tarlov评分和Rivilin斜板实验评分:术后1、3 d,各组间比较差异无统计学意义(P>0.05);术后7、14、21及28 d, A、B、C组与D组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后28 d组织学观察示,A组大鼠脊髓损伤处无明显空洞,损伤区内无明显瘢痕组织,有各种形态细胞形成,部分细胞有明显分化特征;B、C组脊髓缺损处可见少量瘢痕组织填充,并有脊髓空洞形成;D组脊髓断端被瘢痕组织填塞,可见大量炎性细胞和成纤维细胞浸润,并有较大脊髓空洞形成。免疫组织化学观察显示,A、B组可见存活的BrdU标记阳性BMSCs, C、D组未见。A组NF-200和GFAP阳性细胞面积百分比高于B、C、D组,B、C组高于D组,差异均有统计学意义(P<0.05);B、C组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ATP对损伤后的脊髓有保护作用。ATP与BMSCs联合移植可促进损伤脊髓的修复。
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