应用碱性成纤维细胞生长因子基因治疗促进大鼠早期断蒂皮瓣成活的实验研究

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目的 探讨腺病毒介导的碱性成纤维细胞生长因子基因(Ad-bFGF)对大鼠随意皮瓣早期断蒂的影响。方法 SD雄性大鼠,普通级,随机分成三组:重组复制缺陷型腺病毒携带碱性成纤维细胞生长因子基因组(Ad-bFGF目的组)、重组复制缺陷型腺病毒携带绿色荧光蛋白组(Ad-GFP对照组)、磷酸盐缓冲液组(PBS对照组),每组10只。用3%的戊巴比妥钠(30μg/g)腹腔注射麻醉后,俯卧固定,8%硫化钠脱毛,在大鼠背部设计2cm×6cm随意皮瓣,蒂位于髂棘连线水平。皮瓣在背部肌膜浅面掀起,包括皮肤、皮下肉膜层和浅筋膜层。皮瓣掀起后即刻用1ml注射器抽取用PBS稀释的Ad-bFGF溶液或Ad-GFP溶液或直接PBS溶液1ml,从筋膜面向肉膜层和真皮内注射,分别距蒂部2cm、4cm及远端边缘均匀10点注射。随机选取10只大鼠注射Ad-bFGF,10只注射Ad-GFP,10只注射PBS。完成给药后即刻3-0丝线原位缝合,继续单笼饲养、观察大鼠生活情况及皮瓣成活情况。术后4d再次麻醉后断蒂,沿着皮瓣蒂部切开达浅筋膜层,不掀起皮瓣,原位缝合,继续回笼饲养、观察。断蒂后7d,将大鼠再次麻醉,用透明硫酸纸复录皮瓣大小并涂黑坏死区域,用数码相机摄像后输入计算机,以Metamorph软件进行分析,计算皮瓣成活率。切取皮瓣最远端成活组织约1cm×1cm(包括皮肤、皮下肉膜层及部分肌膜),10%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋,4μm连续切片,HE染色,光镜下观察组织学变化。免疫组化分析bFGF的表达,用鼠抗人bFGF单克隆抗体为一抗,采用SP免疫组化法,棕黄色为阳性染色,根据阳性细胞数及着色深浅进行结果判断:弱阳性(+);中度阳性(++);强阳性(+++)。微血管计数,用鼠抗人CD34单克隆抗体为一抗,进行血管内皮细胞标记,在400倍光镜下观察切片,随机选取10个视野进行血管断面计数。结果 断蒂后7d,所有实验动物全部成活。断蒂前各组皮瓣均未坏死,断蒂后目的组皮瓣基本成活,对照组皮瓣远端均出现坏死。皮瓣的平均成活率,目的组
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