目的:FKBP12.6即FK506结合蛋白12.6,是一种能与免疫抑制剂FK506结合、大小为12.6 KD的蛋白质。它可以和内质网上钙离子释放通道Ry R2结合,从而使Ry R2稳定地处于关闭状态,在稳定细胞内钙离子平衡中发挥重要作用。脑缺血是中风的一种,是一种常见的心脑血管疾病。脑缺血损伤时常伴有细胞内游离钙离子异常增加,而钙离子浓度的异常增加被认为是脑缺血损伤的重要机制。由于FKBP12.6在细胞内钙离子平衡中具有重要作用,因此推测FKBP12.6在脑缺血中有重要作用。CDC42即细胞分裂周期蛋白42,在细胞中主要参与细胞骨架蛋白的解聚,与细胞形态、迁移、分裂密切相关。有研究报道Rip(Rat Insulin-2 Promoter)-Cre特异性敲除CDC42小鼠常伴有脑中一些核团(主要是弓状核)的非特异性敲除。弓状核是摄食与能量代谢平衡的调节中枢,故Rip-Cre特异性敲除CDC42小鼠的摄食可能发生变化。因此,本文旨在探究FKBP12.6在脑缺血损伤中的作用及CDC42缺失对小鼠摄食的影响。方法:中脑动脉阻塞手术建模:缺血60min后将线栓拔出再灌,24h后将脑切成1mm厚的脑片行TTC染色,计算缺血区域面积评价神经损伤。FK506给药组缺血前45min腹腔注射FK506,注射剂量为10mg/kg,对照组注射10ml/kg的生理盐水。培养胎鼠原代脑皮层细胞,9天后氧糖剥夺(OGD)处理,处理时间分别为1.5h、3h,对照组不做处理。继续培养24h后,hoechest染色显示凋亡细胞并计数以评价神经损伤。CDC42条件性敲除小鼠和对照组禁食24小时后再给食,监测0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h不同时间段内的摄食量,一周后再监测正常情况下每天的摄食量,连续监测一周。脑部冠状面冰冻切片HE染色观察神经元细胞形态和脑部结构变化,分析Rip-Cre特异性敲除CDC42对摄食的影响。结果:1.动物水平结果显示敲除小鼠FKBP12.6基因对脑缺血损伤没有明显影响。2.细胞水平结果显示FKBP12.6基因敲除鼠的脑皮层神经细胞在OGD-R处理后其凋亡率与对照组没有显著差异。3.动物水平结果显示FK506在FKBP12.6基因敲除和对照组中都具有明显的神经保护作用。4.Rip-Cre特异性敲除CDC42基因可使小鼠体重明显减轻。5.Rip-Cre特异性敲除CDC42小鼠的摄食显著低于对照组。6.Rip-Cre特异性敲除CDC42基因可使小鼠的脑结构发生改变,第三脑室明显减小。结论:1.从动物和细胞水平两方面证明FKBP12.6基因敲除对脑缺血损伤没有明显影响,敲除FKBP12.6基因不影响FK506的神经保护作用。2.Rip-Cre特异性敲除CDC42小鼠的摄食和体重显著下降,第三脑室显著减小,脑结构发生改变。