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前言:由于肿瘤、感染、外伤及先天骨发育畸形等原因造成颌骨缺损的患者在临床上颇为常见。对于颌骨缺损的修复重建,尤其是功能性颌骨修复重建一直是口腔颌面外科医生需要解决的问题之一。目前临床修复颌骨缺损的方法主要为自体非血管化骨移植和自体血管化骨移植。其中非血管化骨本身没有充分有效的血供,且经常由于受区条件的限制而导致修复不佳。自然血管化骨本身由血管蒂供血,可以不被受区域条件的限制进行较好的修复;但是由于其本身血管蒂长度、骨的形状和尺寸,以及位置关系等原因,有时会限制其修复的适应症。通过血管植入预构技术不仅可以使骨瓣得到充分的血供,而且减少了自然血管化骨本身的一些不利因素,是进行骨移植修复的另一手段。目前,国内外关于预构血管化骨的实验研究的报道还不多,预构的主要方式是用一端结扎的动静脉植入,或用肌肉组织复合包裹游离骨瓣的方法。根据国内外学者对上述各种预构骨瓣的研究基础,本实验向保留部分原有血供的兔髂骨的骨松质内植入吻合后的动静脉袢,待血管束发芽并与髂骨内的固有血管形成交通后,进行骨移植;并进行移植后骨组织成活及骨血供重建变化的研究,以便为临床应用提供实验依据。
材料及方法:1.实验动物及分组选用成年健康新西兰大白兔20只,体重2.5-3.5Kg,雌雄不限。按顺序编号,随机分为A、B、C、D四组,每组5只。实验采用自身对照,动物的左侧髂骨进行血管化预构,为实验组;右侧髂骨无血管化预构,为对照组。2.试剂和仪器:99mTc-MDP,中国医科大学核医学;846-Ⅱ,吉林大学;12倍手术显微镜,中国常州三能光学设备有限公司;显微外科器械,中国上海医疗器械有限公司;图像分析仪,中国医科大学组胚教研室。
3.手术方法:步骤1:将动物按0.2ml/Kg肌肉注射“846-Ⅱ”,待麻醉平稳后,左侧位卧于手术台上,固定四肢,用脱毛剂祛除术区毛发,用聚纤酮碘消毒侧腹部及背部,铺无菌巾。沿左侧背部,于髂嵴上缘处做横切口,髂前上棘前缘处做纵切口,解剖腹壁下动静脉外侧皮支,分离并切断附郦于髂骨的肌肉,掀起骨膜,暴露髂骨。在距髂前上棘1.0cm,髂缘约0.5cm处,用低速台式牙钻磨出长约1.0cm、宽约2mm、深达松质骨的沟槽;在距沟槽后方约1cm处,用低速牙钻离断髂骨背侧2/3的骨质,保留腹侧1/3的骨质。手术过程中用生理盐水间断冲洗降温。预构骨瓣大小约为20×20×5mm(长×宽×厚)。于皮下游离腹壁下动静脉外侧皮支中间支4-6cm,达其在腹外斜肌穿出点。将游离的腹壁下动静脉外侧皮支欲行吻合部位的远心端结扎,近心端用血管夹暂时夹闭后分别将动静脉剪断;在12倍的手术显微镜下用11-0的无损伤缝合线将腹壁下动静脉外侧皮支剪断部位的近心端吻合形成动静脉袢,吻合过程中间断用含肝素的生理盐水和2%利多卡因冲洗血管防止血管血栓和痉挛的发生。将吻合后的血管向外旋转植入沟槽,同时将动静脉连带的筋膜组织用6-0缝合线固定于周围的软组织上,防止滑脱。手术注意保护血管蒂免受过度的挤压,牵拉和扭曲,血管通畅约30分钟后将骨膜回复原位,用抗生素盐水冲洗并分层关闭创口。右侧(对照组)亦同法暴露髂骨,在与左侧髂骨相对应部位磨出沟槽并磨断部分骨质,用抗生素盐水冲洗后关闭创口。术后肌注青霉素40万单位连续3天。
步骤2:血管束植入2周后,依同法暴露左侧髂骨。见血管束通畅,搏动良好。将骨瓣彻底离断,连同血管蒂向外旋转于侧腹部皮下袋中,注意保护血管蒂,用3-0丝线固定。抗生素盐水冲洗后,关闭创口。右侧亦同法将骨瓣离断后植于侧腹部皮下袋中,用3-0丝线固定,冲洗,关闭创口。术后肌注青霉素40万单位,连续三天。
4.检测方法:4.1SPECT检测:分别在第二次术后1、2、3、4周进行SPECT检测。耳缘静脉注射99mTc-MDP,注入剂量为4mCi(148MBq)。2小时后,在麻醉状态下进行扫描图像分析,计算机处理影像,计算ECT值。通过计算每一个体内的骨瓣与同一ROI对99mTc-MDP的摄取程度多少的比值来确定实验侧和对照侧骨组织血供和代谢生长状态,并利用SPSS11.5软件进行统计分析。
4.2组织学观察:将SPECT检测后的动物处死,迅速将骨瓣分别取出,制成HE染色切片进行组织学观察。在200倍视野下,每张切片随机选择3个视野,利用图像分析仪MetaMorph软件对血管结构占整个视野面积的百分比进行统计,记录数据,并利用SPSS11.5软件对结果进行分析。
结果1.SPECT检测:1.11、2、3、4周实验组对99mTc-MDP的摄取率分别为:0.95±0.02,1.00±0.02,1.05±0.02,1.05±0.01
1.21、2、3、4周对照组对99mTc-MDP的摄取率分别为:0.73±0.02,0.68±0.02,0.59±0.01,0.51±0.02
1.3同一观察时间,实验组的摄取率与对照组之间有统计学差异(p<0.05)。1.41-3周实验组的摄取率有统计学差异(p<0.05),3、4周实验组摄取率没有统计学差异(p>0.05)。
2.组织学检查:2.11-4周实验组骨组织结构基本正常。
2.21-2周对照组的骨陷窝形态大小很不规则,差别很大,陷窝内的骨细胞形态较小,增殖不活跃,分布不均匀,少数陷窝内可见破骨细胞,骨小梁周边成骨细胞数目减少,无血管形成。
2.33-4周对照组的骨组织失去了正常的结构,大的陷窝形成,排列不规则,骨小梁塌陷,破骨细胞形成增多,正常的骨细胞数目减少,形态萎缩,偶见少量的成骨细胞,在骨的边缘区域有少量血管形成。
2.41、2、3、4周实验组的血管密度分别为:27.67%±2.27%,32.05%±2.37%,36.89%±2.90%,37.67%±3.79%
2.51-3周实验组的血管密度有统计学差异(p<0.05);3、4周实验组的血管密度没有统计学差异(p>0.05)。
结论1.动静脉袢植入预构保留部分原有血供的髂骨瓣能够较快地完成血管化,并能提供维持正常骨组织的形态结构和新陈代谢的物质环境。
2.移植后3周时,预构血管化骨瓣的骨活性良好,血管化程度充分,已经完全成活。