原发性肝癌(以下简称肝癌)是最常见的恶性肿瘤之一，全球每年大约有37万新患病例。手术切除被认为是肝癌的首选治疗方法，然而常常因伴肝硬化、肿瘤多中心生长或肿瘤位置特殊(如贴近膈肌、大血管、胆管等)，仅少数患者适宜根治性手术切除。据统计，肝癌的手术切除率仅10％～20％，手术后5年复发率高达85％～95％。因此，非手术方法在肝癌的综合治疗中起着重要作用。其中，局部化学消融疗法，因其经济而有效、操作简便，早已在国内外广泛开展，已是治疗肝癌的重要手段之一。临床上应用的有无水酒精注射、乙酸注射、盐酸注射及抗癌药、中草药、热盐水、鱼肝油酸钠、低浓度氢氧化钠注射等，而以经皮酒精注射(percutaneous ethanol injection，PEI)、经皮醋酸注射(percutaneousacetic acid injection,PAI)应用最广、最成熟。 经皮局部化学消融治疗(percutancous local chemo-ablation therapy,PLCAT)是指在超声、CT或MR等影像引导下，通过经皮穿刺的介导方法，将化学物质直接送至肿瘤病灶，致使病灶局部细胞发生凝固性坏死，进而达到治疗效果的方法。临床上常用的PEI和PAI，其原理主要是利用无水酒精、醋酸使细胞蛋白变性，进而引发癌组织凝固性坏死。然而，无水酒精注入瘤灶后的被动弥散，受肿瘤组织密度、血运情况、瘤内组织间隔等因素影响，往往弥散范围有限、弥散不均匀，导致消融不彻底、局部复发率高。醋酸可溶解脂质、胶原，比无水酒精更易在肿瘤结节中弥散。文献报道，50％醋酸的消融效果是无水酒精的3倍；然而，50％醋酸灭活肿瘤组织的同时容易对周围正常组织造成损害。 为进一步提高局部化学消融疗法的治疗效果和减少治疗给患者带来的毒副作用，人们仍在不断探索新的消融剂。近年来，有研究发现一种新的化学制剂--对甲苯磺酰胺(para-toluenesulfonamide，PTS)具有较好的抗肿瘤作用，尤其适用于瘤体内局部注射；而且研究发现该药物选择性致肿瘤细胞坏死的同时，对正常细胞损伤轻微。本研究通过向荷瘤大鼠瘤内注射PTS，观察其肿瘤灭活作用特点，为PTS的临床应用提供实验参考。 第一章：大鼠皮下移植性肝肿瘤模型的建立 目的：为研究对甲苯磺酰胺注射液瘤内注射对肝肿瘤的灭活作用，构建大鼠皮下种植性肝癌模型。 方法：1.肿瘤细胞培养：选用CBRH-7919鼠肝癌细胞株，按常规方法培养；2.传代裸鼠的制备：收集指数生长期的CBRH-7919肝癌细胞，加入PBS溶液搅匀，调整细胞浓度为107/L的细胞悬液，将其注入雄性裸鼠背部皮下，每只注射0.1ml，注射后将裸鼠继续放置SPF级环境饲养；3.大鼠皮下移植性肿瘤模型的制作：当传代裸鼠背部皮下长出直径为0.8～1.0cm的肿瘤结节时，处死裸鼠，取出皮下肿瘤，剔除筋膜和坏死组织，选用新鲜鱼肉样部分放置无菌干燥培养皿中，加生理盐水2～3ml，用眼科剪将肿瘤组织剪成糊状，备用。取经免疫抑制处理的雄性SD大鼠，10％水合氯醛麻醉(5ml/kg，ip)，脱去背部体毛，皮肤常规消毒，使用1ml注射器抽取上述备用糊状肿瘤组织注入大鼠背部皮下，每只注射0.1ml。大鼠清醒后放置清洁级环境饲养。待大鼠背部皮下长出直径1.0cm左右大小肿瘤结节，表明SD大鼠皮下移植性肿瘤模型构建成功。 结论：1、CBRH-7919鼠肝癌细胞株生物学特性更接近人肝癌细胞，肿瘤生长速度适宜，适合用于肝癌局部治疗方面的实验研究。2、用SD大鼠建立皮下种植性肿瘤模型，操作方便、成本低、成功率高。 第二章：PTS肿瘤灭活作用的量效关系 目的：初步探讨对甲苯磺酰胺(PTS)注射液肿瘤灭活作用的量效关系。 方法：取SD大鼠皮下移植性肝癌模型42只，按数字随机表法将其随机分为I～VⅠ组，Ⅰ组为对照组，经皮向瘤内注射生理盐水0.10ml；II～VⅠ组为实验组，分别经皮向瘤体内注射33％PTS0.02ml、0.04ml、0.06ml、0.08ml、0.10ml。注射后24h全部处死，观察肿瘤组织坏死情况并测量坏死范围。 结论：1、33％PTS瘤内局部注射后肿瘤灭活彻底，在一定剂量范围内其注射剂量与肿瘤坏死区体积呈近似直线关系。2、PTS瘤内局部注射时，可以根据肿瘤直径大小初步计算使肿瘤完全灭活所需注射总量，其近似关系式为：注射总量Y(ml)=4/3π(d/2)3×0.4，d为平均直径，即肿瘤最大直径a与垂直径b之和的1/2，单位为cm。 第三章：PTS注射时间间隔对其肿瘤灭活作用的影响 目的：初步探讨不同注射时间间隔对PTS肿瘤灭活作用的影响。 方法：取大鼠皮下移植性肿瘤模型60只，先按大鼠的体重大小分为两组：取体重偏小的25只用于病理学观察，另外体重较大的35只用于生存时间的观察。按照数字随机表法将以上两组分别随机分为5个亚组，分别为A1～E1组和A2～E2组。A1～E1组，每组5只；A2～E2组，每组7只。A1、B1、C1、D1组及A2、B2、C2、D2为PTS实验组，E1、E2组为对照组。按照本研究第二章实验得出的结果，根据肿瘤直径大小计算所需注射PTS总剂量。按照计算结果，在A1、B1、C1、D1组及A2、B2、C2、D2组大鼠瘤内注射33％PTS，每次注射总剂量的1/3，共注射3次：注射时间分别为1次/d、1次/3d、1次/5d和1次/7d。对照组E1、E2组按PTS总剂量计算结果在瘤内注射生理盐水，1次/d，每次注射总剂量的1/3，共注射3次。A1、B1、C1、D1、E1组大鼠，均于末次注射后24h脱臼处死，完整取出瘤块，置于10％甲醛溶液固定，石蜡包埋，制片，HE染色，光镜下观察肿瘤组织病理变化。A2、B2、C2、D2、E2组各组大鼠按首次注射当天为0d，测量各组大鼠第7d、14d、21d皮下肿瘤最长径和垂直径，进行各组抑瘤率的比较；同时记录生存时间，截止时间为60d，进行组间荷瘤鼠生存期的比较。 结论：1、对于肿瘤体积较大不能一次使用全量PTS注射时，可以考虑采取短时间间隔分次注射，1次/3d比较适宜。2、若分次较多、治疗周期较长时，应适当增加PTS注射总剂量，延长治疗疗程，以确保治疗更彻底。 第四章：PTS与无水酒精、乙酸三者之间肿瘤灭活作用的比较 目的：大鼠移植性肝癌瘤内PTS注射与无水酒精注射、50％乙酸注射三者肿瘤灭活作用的比较。 方法：将60只SD大鼠皮下移植性肿瘤模型随机分为4组，即PTS组、无水乙醇组、乙酸组和对照组，分别经皮瘤内注射33％PTS、无水乙醇、50％乙酸和生理盐水。用药前根据肿瘤直径计算使肿瘤完全灭活所需要注射33％PTS、无水乙醇和50％乙酸的总量。将总量均分3次瘤内注射，1次/3d，多点注射。对照组瘤内注射生理盐水，0.1ml/次，1次/3d，共3次。每组随机分为两个亚组，分别为5只和10只。其中，各5只组于末次注射后24h处死，观察各组荷瘤鼠肿瘤及心、肝、肺、肾等组织病理变化；各10只组用于观察生存期并测量首次注射后7d、14d和21d肿瘤直径，计算肿瘤抑制率。 结论：1、33％PTS、无水乙醇和50％乙酸瘤内局部注射治疗大鼠肝肿瘤，都具有较好的肿瘤灭活作用，均不同程度地抑制大鼠肿瘤生长，延长荷瘤鼠生存时间；33％PTS肿瘤灭活作用较无水乙醇、50％乙酸更为显著。2、33％PTS、无水乙醇和50％乙酸瘤内局部注射，荷瘤鼠心、肝、肺、肾重要器官未见组织病理学改变，毒副作用小。