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目的:桥本甲状腺炎(Hashimoto thyroiditis,HT)是由多种致病因素相互作用导致的一种器官特异性自身免疫性疾病。大量研究表明HT的致病与细胞凋亡有关。课题组前期研究显示,HT患者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中白介素1-β(Interleukin-1β,IL-1β)的表达水平明显高于格雷夫斯病(Graves’disease,GD)患者和正常人。本研究主要探讨在体外白介素1-β是否诱导甲状腺细胞的凋亡,以及可能存在的分子机制。方法:1.对体外培养的大鼠甲状腺细胞系(FRTL-5细胞),采用两种干预方法:(1)使用终浓度分别为10 ng/ml、20 ng/ml、40 ng/ml的IL-1β干预FRTL-5细胞48 h为IL-1β刺激组,未经IL-1β作用的FRTL-5细胞为对照组,收集细胞后运用Real-Time PCR方法检测Fas m RNA的相对表达量;(2)终浓度为20 ng/ml的IL-1β干预FRTL-5细胞为IL-1β刺激组,未经IL-1β作用的FRTL-5细胞为对照组,分别培养6h、12h、24h、48h后收集细胞后应用Real-Time PCR方法检测Fas m RNA的相对表达量。2.运用蛋白免疫印迹(WB)方法检测IL-1β组(20 ng/ml,24 h)、Caspase-8抑制剂组(20μmol/L Z-IETD-FMK+20 ng/ml IL-1β)与正常对照组,分别比较各组Fas、Caspase8在蛋白水平的差异表达。3.运用流式细胞术分析在不同浓度IL-1β组(0、10ng/ml、20ng/ml IL-1β)以及Caspase-8抑制剂组(20μmol/L Z-IETD-FMK+20 ng/ml IL-1β)干预下FRTL-5细胞凋亡率的变化,分别比较组间甲状腺细胞凋亡率的差异。结果:1.Real-Time PCR测定结果显示,IL-1β刺激组Fas m RNA的表达量与对照组相比,呈剂量依赖性增加。其中20 ng/ml组和40 ng/ml组高于对照组,差异有统计学意义(x±s分别为1.758±0.07143,1.296±0.06858,P<0.05)。Fas m RNA的表达量与IL-1β作用呈时间依赖性,与对照组相比,予20 ng/ml浓度IL-1β作用6 h、12 h、24 h、48 h时Fas m RNA表达均增高,差异有统计学意义(x±s分别为1.755±0.1903,2.352±0.3720,3.633±0.6501,2.439±0.05154,P<0.05)。2.免疫印迹结果显示,与正常对照组相比,20ng/ml IL-1β组Fas蛋白和Caspase-8蛋白的表达量明显增加,差异有统计学意义(x±s分别0.9713±0.05847,1.130±0.08295,P<0.05)。而20μmol/L Z-IETD-FMK+20 ng/ml IL-1β组Fas蛋白和Caspase-8蛋白的表达量较20ng/ml IL-1β组均有明显下降,差异有统计学意义(x±s分别0.7270±0.04980,0.8533±0.01584,P<0.05)。3.流式细胞术结果显示,与正常对照组相比,不同浓度(10 ng/ml IL-1β及20 ng/ml IL-1β)分别干预FRTL-5细胞24 h后甲状腺细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(x±s分别为11.45%±1.826%,21.60%±2.996%,P<0.05)。预先给予Caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK 1 h后再予IL-1β干预细胞24 h,结果显示,甲状腺细胞凋亡率较20 ng/ml IL-1β干预组明显下降,差异有统计学意义(x±s分别为9.183%±2.830%,P<0.05)。结论:IL-1β以剂量和时间依赖性的方式上调甲状腺细胞Fas的表达能诱导甲状腺细胞凋亡。IL-1β可能通过上调Fas蛋白表达和激活Caspase-8途径来诱导甲状腺细胞凋亡。