本文对斑点叉尾鮰疱疹病毒核酸探针检测方法进行了研究。采用PCR方法制备地高辛标记DNA探针,分别建立了CCV PCR-ELISA检测方法和斑点杂交检测方法,主要结果如下:1.根据CCV的ORF6基因设计引物和捕获探针,其中捕获探针的5′端标记生物素,PCR产物在扩增过程中标记地高辛,利用经链亲和素包被的聚苯乙烯96孔酶标板固相杂交检测PCR产物,建立了CCV的PCR-ELISA检测方法。2.进行PCR反应条件的优化,结果表明:优化的PCR反应条件为25μL反应体系:1×PCR缓冲液、0.4 mmol/L dNTP、4 mmol/L Mg²⁺、上下游引物各0.4 mmol/L、TagDNA聚合酶1.0 U、模板1μL、用灭菌去离子水补足体积25μL。PCR扩增条件为:95℃预变性5 min、94℃30 s、58℃45 s、72℃30 s、35个循环;72℃延伸10 min,4℃保温。在最优的PCR反应条件下,将dNTP替换为DIG-dNTP,进行PCR产物标记反应,电泳结果表明成功将PCR产物标记上地高辛。3.建立PCR产物的固相杂交检测程序,并进行杂交条件的优化,结果表明最优的固相杂交检测参数为:最优探针包被浓度为50 pmol/mL;最优的杂交温度为42℃;最优的杂交时间为90 min。4.方法的特异性和敏感度检测实验表明:反应特异性强,与各对照均无交叉反应;反应敏感度为5 fg CCV DNA。5.利用所建立的检测方法对人工感染样品进行检测,结果表明:所建立的方法能够用于人工感染样品的检测;利用常规琼脂糖凝胶电泳法对经检测判定为阳性的15份样品进行检测时,其中2份样品显示阴性,证明所建立方法敏感性更强。6.采用PCR方法制备地高辛标记DNA探针,建立了CCV斑点杂交检测方法。检测阈值为20 pg,特异性强。该检测技术可节省检测成本,为CCV的诊断提供更简单快捷的技术。