论文部分内容阅读
目的：建立新疆特色药材黑果小檗质量控制的方法，探讨应用近红外光谱技术结合光谱处理软件及化学计量学方法对该药材进行定量分析及鉴别。方法：1.建立薄层色谱法对黑果小檗药材进行鉴别，以盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱为对照品，并考察不同展开系统、不同点样量、不同薄层板、不同检视方式、不同温度、不同湿度对黑果小檗药材薄层色谱的影响；2.建立HPLC双波长法同时测定黑果小檗中盐酸药根碱、盐酸小檗胺、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱含量的方法，测定不同产地不同药用部位4种生物碱的含量并进行比较；3.测定了10批黑果小檗药材样品的水分和总灰分；4.采用紫外分光光度法测定黑果小檗中总黄酮的含量，并通过DPPH、羟自由基和超氧自由基清除法评价黑果小檗提取物的抗氧化活性；5.以聚酰胺薄膜为固定相，微乳液作为展开剂，同时鉴别黑果小檗药材中的多种主要成分，考察微乳类型、十二烷基硫酸钠、正丁醇、甲酸等因素对分离效果的影响；6.近红外漫反射光纤光谱结合偏最小二乘法、主成分回归法建立数学模型对黑果小檗皮中盐酸小檗碱进行快速定量分析；7.近红外漫反射光纤光谱结合主成分分析和聚类分析对黑果小檗皮产地及真伪的鉴别。结果：1.以盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱为对照品，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨水（6:3:2:1.5:0.5）为展开系统，黑果小檗药材薄层鉴别特征明显；2.建立了利用HPLC测定黑果小檗中生物碱含量的方法，在该色谱条件下，盐酸药根碱、盐酸小檗胺、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱分别在1.9562.4μg·mL-1、9.80313.60μg·mL-1、132μg·mL-1、4.93157.6μg·mL-1范围内呈良好线性关系，r=0.9998、0.9997、0.9999、0.9999（n=6），平均加样回收率分别为99.27%、98.46%、99.26%、98.46%，RSD分别为2.17%、2.35%、2.94%、1.63%（n=9）；3.根据样品水分及总灰分测定结果，建议黑果小檗皮药材水分含量控制在8.05%以下，将黑果小檗果药材水分含量控制在15.48%以下；黑果小檗皮总灰分含量控制在7.82%以下，黑果小檗果总灰分控制在4.15%以下；4.利用紫外分光光度法测得黑果小檗果实中总黄酮含量较高，其次为茎皮及根皮；黑果小檗各药用部位提取液对DPPH清除活性的变化规律为：果>茎皮>根皮；对·OH清除活性的变化规律为：根皮>茎皮；对O2·-清除活性的变化规律为：果>茎皮>根皮；5.以微乳液（SDS-正丁醇-正庚烷-水=2.7∶6.3∶1.0∶30.0，g/g）为展开剂，同时检出黑果小檗皮中盐酸小檗碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀，操作简单，分离效果理想；6.黑果小檗皮近红外光谱结合偏最小二乘回归和主成分回归法建立其定量分析模型，结果表明，黑果小檗皮中盐酸小檗碱的内部交叉验证均方差分别为0.8102、1.0169，内部交叉验证决定系数分别为0.9871、0.9795，预测平均回收率分别为101.40%、108.51%，统计学检验表明NIR预测值与标准方法测定值之间的差异无统计学意义，表明利用近红外光谱法对黑果小檗进行定量分析可行；7.主成分分析及聚类分析可将收集到的39份黑果小檗皮样本分为3大产区，所建立的定性鉴别模型对其余14份预测集样本进行鉴别，分析结果与实际所属基本一致。表明利用近红外光谱法对黑果小檗皮进行产地及真伪鉴别可行。结论：本研究建立了新疆特色药材黑果小檗的TLC定性鉴别方法及HPLC测定生物碱含量的方法，所制定的方法可用于评价和控制黑果小檗药材的质量；黑果小檗提取物具有一定的抗氧化能力，本研究可为天然抗氧化剂的开发提供依据；研究建立的微乳薄层色谱鉴别法作为一种新型的色谱技术，可以简便、准确、高效地鉴别黑果小檗中生物碱，且点样量为普通色谱条件用量的一半，检出灵敏度显著提高，并且不使用刺激性强且有毒的有机溶媒如浓氨水、甲苯等，减少了环境污染并降低了实验成本；近红外漫反射光谱技术结合化学计量学方法具有分析速度快、效率高、成本低、测量重现性好、样品测量一般无需预处理且分析过程不破坏样品等特点，本课题利用其独特的优势应用于黑果小檗皮的定性及定量分析中，为黑果小檗皮的质量控制提供了新的手段，可作为新疆特色药材黑果小檗皮质量控制的辅助检测方法。