厚荚相思转基因受体系统建立及遗传转化初步研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:li81641143
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本试验以厚荚相思茎段、叶片和瘤状物为外植体,采用不同的培养条件对上述外植体进行培养,建立了相思树高效再生系统,比较了再生系统中瘤状物与正常苗的若干生理生化差异,并用根癌农杆菌介导法进行了PEAS基因、ACS反义基因转化厚荚相思瘤状物的初步研究。其主要研究结果如下:1.建立了厚荚相思无菌系。通过不同激素浓度浸泡对种子萌发影响的研究发现,浓硫酸结合25mg/L的IAA溶液浸泡8h为较为理想的处理方式,其发芽率可达到48.9%。2.以茎段、叶片和瘤状物为外植体建立相思树高效率再生系统。其中,最适合茎段增殖的培养基为MS+2.0mg/L KT+0.6 mg/LGA,其增殖率可达到4.125。叶片愈伤组织的诱导率是和2,4-D浓度的增长成正相关,在不添加2,4-D的培养基中,叶片会产生大量的不定根,采用3.0 mg·L-1BA和1.5 mg·L-12,4-D有利于叶片愈伤组织的诱导,而叶片再生最佳培养基为:MS+3.0 mg·L-1ZT。在瘤状物再生系统优化的过程中,对绿色瘤状物进行切割能提高瘤状物的诱导且芽苗的增殖速度也较快。其中适合瘤状物生长最佳培养基即MS+2.0mg/L BA+3mg/L IAA。在厚荚相思壮苗生根过程中,1/4MS+0.05 mg/LNAA为状苗生根的最佳培养基,生根率可达100%。NAA在生根诱导中没有起者关键的作用,而NAA的添加对壮苗影响程度较大。采用泥炭土移栽的成活率最高达到66.7%。3.进行厚荚相思瘤状物与正常苗的生理生化指标的测定。试验表明:除了DNA含量接近以外,在瘤状物中CAT酶、过氧化物酶和蛋白质含量都高于普通的正常苗,SDS-PAGE分析也表明瘤状物在分子量为13.8kD多山一个条带。这些差异的出现可能是与瘤状物所处的发育阶段有关。4.对相思绿色瘤状物进行卡那霉素、潮霉素、羧卞青霉素和头孢霉素抗生素敏感性试验。试验结果表明:400mg/L浓度的卡那霉素明显抑制了瘤状物的生长,可作为有效的抗性筛选浓度。瘤状物对潮霉素较为敏感,10mg/L潮霉素可以作为抗性筛选浓度。而羧卞青霉素和头孢霉素不影响瘤状物的生长。5.对农杆菌感染相思绿色瘤状物进行初步研究,获得了转入ASC反义基因的GTT,并已分化出小芽。试验结果表明:PEAS基因导入相思瘤状物很难获得抗性瘤状物,瘤状物对菌株EHA105的敏感性不高,直接抗性筛选过程中瘤状物容易褐变死亡,采用延迟筛选的方法将侵染过的瘤状物在MS+2.0mg/LBA+3.0mg/LAA+100mg/L羧卞青霉素培养基上进行恢复生长一个月,再进行抗性筛选也很难获得抗性瘤状物。在ACS反义基因转化厚荚相思的研究中,0D6001.0-1.5的农杆菌重悬液侵染瘤状物10-20min,共培养培养基pH值为5.8,为本转化系统适合的转化条件。再对转化ACS反义基因的转化体进行抗性筛选研究,采用延迟筛选的方法将侵染过的瘤状物在MS+2.0mg/LBA+3.0mg/LAA+100mg/L头孢霉素培养基上进行恢复生长一个月,再置于MS+2.0mg/LBA+3.0mg/LAA+200-400mg/L卡那霉素+100mg/L头孢霉素培养基上筛选一个月,选择后的瘤状物置于MS+2.0mg/LBA+3.0mg/LAA+400mg/L卡那霉素+100mg/L头孢霉素培养基上继续筛选2个月。最后获得10个转ACS反义基因的抗性瘤状物系,转化的瘤状物已开始分化小芽点,经GUS组织化学检测表明gus基因已整合进瘤状物中。
其他文献
人和动物的胃肠道是一个复杂的微生态系统,维持微生态系统的平衡,对于维持机体的健康有重要作用:拮抗病源菌、维持肠粘膜屏障的完整性、调节免疫、合成营养成分等。当微生态失调
陆地生态系统的碳循环是全球碳循环的重要组成部分,土壤呼吸是陆地生态系统与大气间C02交换的一个重要环节。尽管目前土壤呼吸的野外观测已经从基于样地尺度的实验观测转向土
张隽先同李可染一样,侧重于表现山川的险峻雄伟、鬼斧神工的一面  《百年巨匠·李可染》开机仪式与“京铁烟云”李可染系列作品展《书法篇》开幕式去年底同时在北京画院举行。亲耳聆听可染夫人邹佩珠的深情演说,对可染更是推崇备至。李可染曾拜师齐白石,潜心十年,取得真经,终成一代大师。李可染一生除了留下许多艺术瑰宝,也育人无数。  上世纪70年代末期,身为中央美术学院教授的李可染在武汉举办过一届“山水画高级研习
摘要:人教版高中生物新教材中设置的特色栏目“资料分析”,不仅可以充实教材内容,拓展知识领域,而且能让教师更好地掌控课堂节奏、活跃课堂气氛。如果教师利用好“资料分析”,不仅可以逐步提升学生搜集和处理科学信息的能力,而且还可以培养学生的生物学科素养。  关键词:高中生物;资料分析;学科素养  中图分类号:G633.91 文献标识码:A 文章编号:1992-7711(2017)08-0050  新课程的
在新中国影视界与艺术界,  祖绍先是值得一书的。  在新中国影视界与艺术界,有一位人物,是值得一书的。  文革中有一幅油画——《毛主席去安源》,曾经轰动全国,他参与创作;文革后其创作的作品与郭沫若、启功、赵朴初等艺术大师作品同堂展出;为五百余部电影、电视剧、电视片题写片名并作美术设计……  他,就是中国中国电影美术学会副会长、中国广电总局美术家协会副主席祖绍先。  按照祖绍先自己的话说,他这一生做