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目的:研究加载不同时间流体剪切力(Fluid Shear Stress,FSS)对MC3T3-E1成骨细胞中piezo1机械敏感型离子蛋白表达的影响研究以及Piezo1机械敏感型离子蛋白对小鼠MC3T3-E1成骨细胞迁移的影响。方法:利用自行设计的平行平板FSS加载装置,对MC3T3-E1成骨细胞施加12 dyn/cm~2 FSS 0、15、30、45、60、90 min,采用Western blot和免疫荧光染色实验检测piezo1机械敏感型离子蛋白的表达水平。取第5~10代小鼠MC3T3-E1成骨细胞,分为Piezo1-小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染组(A组)、阴性对照组(B组)和空白对照组(C组)。A、B组分别采用siRNA转染试剂将Piezo1-siRNA或阴性对照siRNA转染入小鼠MC3T3-E1成骨细胞,C组仅加入siRNA转染试剂,在倒置相差显微镜及荧光显微镜下观察细胞形态并计算转染效率。采用免疫荧光染色和Western blot检测各组Piezo1蛋白表达水平;采用Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验检测Piezo1-siRNA转染后MC3T3-E1成骨细胞迁移能力的变化。结果:免疫荧光清晰显示piezo1蛋白明显表达于MC3T3-E1成骨细胞细胞质及细胞核,细胞质尤为明显。Western blot检测和免疫荧光强度显示,对体外培养的MC3T3-E1细胞加载12 dyn/cm~2FSS,随着加载时间的延长,piezo1蛋白表达逐渐上调,在45 min左右达到高峰,之后再次下降。转染48 h后,A组可见细胞体积较未转染细胞略有增大,细胞突变长增粗,但细胞集落有所减少,悬浮细胞较未转染增多,细胞碎片增多。荧光显微镜下可见B组小鼠MC3T3-E1成骨细胞中出现绿色荧光,转染效率为68.56%±4.12%。免疫荧光染色及Western blot检测示,A组细胞内Piezo1蛋白表达水平均显著低于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05);B、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell细胞迁移实验及细胞划痕实验检测示,A组每孔迁移细胞数及培养1~4 d的细胞划痕愈合率均明显低于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05);B、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:加载不同时间的12 dyn/cm~2 FSS能够上调MC3T3-E1成骨细胞piezo1机械敏感型离子蛋白,且加载45 min最合适。沉默Piezo1基因能显著抑制小鼠MC3T3-E1成骨细胞的迁移能力。