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近年来,纤维素酶在制浆造纸工业中的应用研究不断增多并受到越来越多的关注,如改善纸浆的滤水性、降低打张能耗、改善成纸的某些强度性质、改善浆料的碱溶解度、脱墨、预漂、助漂等。酶在制浆造纸中的应用,不仅能改善制浆性能和成浆性质,而且能从根本上减轻或减少污染物的发生量以及能源的消耗。本研究利用毕赤酵母表达体系,分别分泌表达了三种内切纤维素酶EG1、CMGL504和STCE1并对三种重组内切纤维素酶进行了性质分析及发酵制备。实验选择发酵条件良好的EG1为酶对象研究了:1)内切纤维素酶对废纸纤维修饰及其脱墨效果;2)内切纤维素酶对针叶木纤维修饰及其酶促打浆效果;3)内切纤维素酶预处理对针叶木浆纤维回用性能的影响。研究得到以下结果:1、在毕赤酵母中分泌表达内切纤维素酶EG1,采用α信号肽表达效果优于EG1自身信号肽,摇瓶发酵酶活最高达到18.8U/ml,10L发酵罐甲醇补料诱导144h后发酵上清液酶活达到180U/ml。重组内切纤维素酶EG1最适温度为50℃,最适pH为4,在弱酸至中性pH范围都能保持80%以上的pH稳定性。2、内切纤维素酶CMGL504和STCE1在毕赤酵母中分别采用自身信号肽的表达效果优于α信号肽。cMGL 504自身信号肽表达摇瓶甲醇诱导发酵120h,发酵酶活达到12U/ml。重组内切纤维素酶CMGL504最适温度为50℃,最适pH=8,其在pH中性范围附近都能保持比较高的pH稳定性。重组内切纤维素酶STCE1通过自身信号肽表达摇瓶甲醇诱导发酵120h,发酵上清液酶活达到6.6U/ml。重组内切纤维素酶STCE1最适pH为4.5,其在较广的pH范围都能保留80%以上的残余酶活力,最适温度为60℃,在80℃的高温下保温1h仍保留约25%的酶活力。3、相比于CMGL504和STCE1,EG1上罐发酵产量高易制备,因而选择作为应用的酶对象。内切纤维素酶EG1在现有的工艺条件下对废旧报纸(ONP)的脱墨效果不佳而对混合办公废纸(MOW)有比较好的脱墨效果。以1U/g作用,可相比于空白对照提高白度约2%ISO,降低残余油墨量约10%,耐破指数和抗张指数分别可以提高7.1%和16.7%而撕裂指数基本不受影响。4、当内切纤维素酶EG1的作用条件为3U/g时,在50℃条仵下作用1h,能够与商品生物打浆酶在5U/g条件下取得接近的酶促打浆效果,但相比于空白实验组会对成纸的机械性能造成负面影响。内切纤维素酶EG1以3U/g作用于针叶木浆,能够有效改善浆料的回用性能。一轮回用后纤维扭结指数可下降44.6%,两次回用后抗张指数和耐破指数相对空白组能够分别提高10.1%和6.6%。同时,内切纤维素酶的处理还能够减慢纤维结晶度和结晶尺寸的的増长速率,延缓纸张的老化。