目的 本研究拟探讨FGD6(faciogenital dysplasia)基因对肝干细胞分化的调控作用。方法 1.选取FGD6基因的RNA干扰靶序列,将目的片段克隆到穿梭载体p SES-HUS上,再与骨架质粒p Adeasy-1共转化到感受态细胞中,然后接种到卡那霉素平板中,挑选出阳性克隆。将构建的质粒测序。2.将测序证实正确的质粒使用Ad Easy系统构建腺病毒载体,包装并扩增重组腺病毒载体p SES-FGD6-si RNA。3.使用细胞免疫荧光法检测FGD6蛋白在肝干细胞HP14.5细胞中的表达水平及表达定位。4.用腺病毒载体p SES-FGD6-si RNA感染HP14.5细胞,使用实时荧光定量PCR检测FGD6、甲胎蛋白(AFP)及白蛋白(Alb)的mRNA水平,Western blot检测FGD6、AFP及Alb的蛋白表达水平。每组细胞均设置p SES-Ad-RFP腺病毒空载体感染进行对照。5.本研究所有数据使用均数±标准差(x±s)表示,并采用单因素方差分析的方法进行数据统计分析。结果 1.成功构建腺病毒载体p SES-FGD6-si RNA,并完成病毒的扩增及纯化。2.细胞免疫荧光检测结果显示FGD6蛋白在肝干细胞HP14.5细胞中呈高表达,主要定位在细胞核中。3.用腺病毒载体p SES-FGD6-si RNA感染HP14.5细胞,成功下调FGD6基因在HP14.5细胞中的表达,同时,AFP的mRNA及蛋白的表达降低,而Alb的mRNA及蛋白的表达升高(P<0.01)。结论 抑制FGD6基因在肝干细胞HP14.5细胞中的表达,可使HP14.5细胞向肝细胞方向分化。因此,FGD6基因对肝干细胞的分化可能起着重要的调控作用。