目的随着医学影像技术的发展,肿瘤的放射治疗技术迅猛发展,许多先进的放疗技术广泛应用于临床。在杀死肿瘤的同时,照射区域正常组织也出现急慢性损伤。肠粘膜组织增殖较快,肠道成为最敏感最易出现放射性损伤的器官。泛素(ubiquitin,Ub)是一种广泛存在于真核生物中含有76个氨基酸残基的小分子蛋白,其氨基酸序列极其保守,不同种类高等生物中的Ub一级结构几乎相同。有研究表明,细胞外的游离泛素(free Ub)具有抗炎特性,可作为一种免疫调节剂,并已经证明在活体和组织损伤模型中能够抑制炎症和降低组织损伤。但是,有关胞外free Ub与电离辐射之间的关系,以及在free Ub的作用下电离辐射对肠道细胞的影响,未有文献报道。因而我们设想free Ub是否能减轻辐射导致的肠道损伤,对放射性肠道损伤起到修复作用。方法采用MTT法检测不同浓度free Ub预处理大鼠肠上皮细胞IEC-6 X射线照射后细胞活力。采用LDH试剂盒检测free Ub预处理后肠细胞不同剂量X射线照射后乳脱氢酶的释放。以及采用EDU试剂盒检测free Ub预处理肠细胞辐照后细胞增殖情况。采用手持细胞计数器检测free Ub预处理肠细胞辐照后细胞数目,并通过细胞划痕实验检测free Ub预处理肠细胞辐照后对细胞迁移的影响;通过流式细胞仪检测free Ub预处理对肠细胞辐照后凋亡的影响;通过JC-1线粒体膜电位试剂盒检测辐照后肠细胞线粒体的功能。通过生物信息学分析筛选c57小鼠free Ub腹腔注射组与对照组小鼠小肠组织差异信号通路,Luminex方法高通量检测free Ub预处理组与对照组小鼠血清中的细胞因子改变;通过Western blot检测肠细胞辐照后活性因子相关蛋白的表达;采用MTT法检测肠细胞培养基上清对细胞活力的影响,并通过ELISA试剂盒检测free Ub预处理后对肠细胞培养基上清中活性因子含量的影响。采用LDH试剂盒检测free Ub联合SDF-1α对辐照后肠细胞乳酸脱氢酶的释放,以及EDU检测free Ub联合SDF-1α对辐照后肠细胞增增殖的影响。结果肠细胞IEC-6经free Ub预处理后,与对照组相比,细胞活力增强,辐照后胞外乳酸脱氢酶含量减少,细胞增殖能力提高,且细胞数目增加。经free Ub预处理辐照后肠细胞迁移速率加快,线粒体功能较为完整,但对辐照后肠细胞凋亡的抑制效果不明显。通过生物信息学分析检测到free Ub腹腔注射组与对照组c57小鼠小肠组织中分泌相关通路改变,并通过对小鼠血液高通量分析筛选到差异最为明显的碱性成纤维细胞细胞因子FGF2的改变,且通过Western blot检测到FGF2在free Ub预处理辐照后肠细胞中高表达。MTT法检测肠细胞培养基上清预处理的肠细胞在辐照后细胞活力增强,且ELISA检测到free Ub促进了辐照后肠细胞胞外分泌较多的FGF2。SDF-1α单独处理肠上皮细胞可促进细胞活力,并且与free Ub联合作用可有效减少辐照后细胞LDH释放,减轻辐照导致的细胞坏死。free Ub与SDF-1α联合作用与free Ub单独处理对肠细胞俊可促进肠细胞增殖,但非照射条件下free Ub联合SDF-1α与free Ub单独处理相比可有效促进细胞增殖,但照射条件下free Ub单独处理组对肠细胞增殖产生的促进作用更加明显,且胞内free Ub蛋白表达较多。结论free Ub预处理能有效增强肠细胞电离辐射后细胞活力及细胞增殖与迁移能力,减轻辐照后细胞膜受损及线粒体功能丧失,其机制与free Ub诱导胞内成纤维细胞生长因子FGF2的的表达及胞外分泌有关。本研究揭示了free Ub激活FGF2对肠细胞辐射损伤后的作用,也为放射性肠损伤的治疗提供了新的方法。