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第一部分屋尘螨特异性免疫治疗的IgE易化变应原结合试验的检测方法的建立和验证目的:建立以屋尘螨变应原为对象的IgE易化的变应原结合试验(IgE-facilitated allergen binding assay,IgE-FAB)的方法学以及对IgE-FAB试验进行验证,用于对屋尘螨变应原特异性免疫治疗(specific immunotherapy,SIT)患者血清中的阻断抗体功能的检测。方法:IgE-FAB是IgE-变应原复合物结合到EBV-B细胞上低亲和力受体FcεRII(CD23)上的抗原递呈过程,按照国际医药法规协会(ICH)的实验方法学建立屋尘螨变应原特异性IgE-FAB试验的方法,以及验证该试验方法的条件依赖性、批内和批间差异、重复性、敏感度、线性度和稳健性。结果:屋尘螨变应原浓度在1至5μg/ml的范围内,变应原-IgE复合物与B细胞可出现较好的结合率。而变应原浓度为2μg/ml时,SIT的血清有最佳的相对结合率,为35.0±22.0%。变应原-IgE复合物与B细胞的结合率和指示血清中的特异性IgE浓度呈极强相关性(r=0.898,p<0.001)。IgE-FAB试验的批内和批间差异结果显示:阳性质控血清结合率及阴性血清相对结合率的总变异系数分别为10.28%和11.70%均小于ICH指南要求的值15%。结论:以屋尘螨变应原为对象的IgE-FAB试验有良好的可重复性和稳定性,对SIT临床疗效的判定有着良好的敏感性和特异性,可用于监测屋尘螨SIT阻断性抗体功能的变化及预测临床疗效,可作为屋尘螨特异性免疫治疗的实验室检测的免疫学指标。第二部分屋尘螨特异性IgG4抗体的功能在屋尘螨特异性免疫治疗中的变化及其与临床症状的关系目的:阐明屋尘螨特异性免疫治疗过程中屋尘螨特异性IgG4抗体功能的变化情况以及其与临床疗效改善的关系。方法:本研究选取在广州医科大学附属第一医院变态反应科接受屋尘螨特异性免疫治疗3年的轻度-中度哮喘和/或过敏性鼻炎的患者52例,选取同期的轻度-中度哮喘和/或过敏性鼻炎接受药物治疗的患者31例作为对照。在治疗前、治疗4周、12周、16周、52周、104周和156周分别对患者哮喘和鼻炎症状及用药情况进行评估,计算症状计分与用药计分的日均综合评分,检测第一秒用力肺活量预计值百分比(FEV1%)、用力肺活量预计值百分比(FVC%)及气道高反应性(AHR)。检测各个治疗时间的血清屋尘螨特异性IgE(Der p sIgE)、粉尘螨特异性IgE(Der f s IgE)、总IgE、屋尘螨特异性IgG4(Der p sIgG4)的浓度以及对各个治疗时间的血清进行IgE-FAB试验。分析临床指标及实验室指标的动态变化以及对屋尘螨特异性IgG4的浓度、IgE-FAB相对结合率与综合评分之间的关系进行相关分析。结果:SIT组在治疗12、16、52、104、156周的综合计分与治疗前比较均显著性下降(P<0.05);对照组在治疗12、16、52、104、156周较治疗前显著性下降(P<0.05);在治疗16周、52周、104周、156周,SIT组综合计分与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。SIT组及对照组在治疗各时间点FEV1%预计值与治疗前比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。SIT组及对照组在治疗各时间点FVC%预计值与治疗前比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。SIT组AHR级别在治疗52周(1.50±1.37)、104周(1.50±1.34)、156周(1.18±1.08)与治疗前(1.85±1.5)比较均显著性下降(P<0.05);对照组无显著性变化。SIT组血清Der p s IgG4浓度在治疗12周(844.03±1103.69)、16周(4454.37±4417.18)、52周(16031.87±21457.52)、104周(27522.23±29689.03)、156周(31593.92±41203.70)较治疗前(430.67±573.38)均显著性上升(p<0.01);对照组无显著性变化;在16,52,104和156周,SIT组Der p-IgG4水平与对照组比较均有显著性差异(P<0.001)。SIT组治疗16周(71±22%)、52周(45±22%)、104周(35±18%)、156周(31±15%)的IgE-变应原复合物相对结合率较治疗前(104±24%)均显著性下降(P<0.001);对照组无显著变化;在治疗16周、52周、104周、156周,相对结合率与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。Der p sIgE浓度在治疗的52周(71.25±103.75)、104周(73.79±117.67)、156周(62.75±86.50)较治疗前(96.98±126.98)均出现显著下降(P<0.05);对照组无显著性差异。SIT组治疗52周、104周、156周Der f sIgE浓度较治疗前均出现显著下降(P<0.05),对照组无显著性差异。两组总IgE在各时间点无显著性下降(P>0.05)。SIT组Der p s IgG4水平与症状用药的综合评分在治疗52周、104周、156周的维持阶段均呈线性相关关系(P<0.05),在4周、12周、16周的起始阶段均无相关性(P>0.05)。SIT组IgE-变应原复合物相对结合率与症状用药的综合评分在治疗52周、104周、156周的维持阶段均呈线性相关关系(P<0.05),在4周、12周、16周的起始阶段均无相关性(P>0.05)。结论:屋尘螨SIT在治疗早期即可提高血清sIgG4水平及其阻断屋尘螨变应原与sIgE结合的功能,而在长期维持阶段可以下调血清屋尘螨sIgE水平。相比于SIT起始阶段,SIT维持阶段sIgG4及阻断功能与症状用药评分更为相关,SIT维持阶段可能是SIT诱导机体免疫耐受形成的主要阶段。