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[目 的]原发性胆汁性胆管炎(Primary Biliary Cholangitis,PBC)是以慢性进行性胆汁淤积及肝内中、小胆管非化脓性炎症为特征的自身免疫性肝病,目前发病机制不清。胆管上皮细胞(Biliary Epithelial Cells,BEC)靶向破坏是P BC的重要特征,胆汁成分紊乱引起的BEC损伤可能是PBC发病的起始。肝脏分泌的胆汁通过胆囊排入肠道,其中一部分在小肠末端被重吸收回到肝脏,即肝肠循环。肠道菌群具有维持宿主内环境稳定的作用。PBC时肠菌紊乱已经得到证实,且PBC患者血清中代谢物酪氨酸,苯丙氨酸等水平发生改变。对甲酚硫酸盐(p-cresyl sulfate,pCS)/对甲酚葡糖醛酸(p-cresyl gluronide,pCG)是酪氨酸和苯丙氨酸的代谢物,具有多种生物活性和毒性作用。炎症持续是PBC发生发展的一个关键环节,而紊乱的肠菌及代谢物是炎症持续的重要因素。梭菌代谢物pCS/pCG对肝内炎症和BEC的作用机制具体不清。因此,研究pCS/pCG在动物体内对肝内炎症及肝内胆管上皮细胞的作用;培养人肝内胆管上皮细胞(HIBEpiC),加入不同浓度的pCS/pCG,研究pCS/pCG对人肝内胆管上皮细胞的作用,阐明pCS/pCG对肝内炎症及胆管上皮细胞的作用,从而可能参与PBC发病,为临床寻找新的治疗靶点提供理论基础。[方法]第一部分:研究pCS/pCG在动物体内对肝内炎症及肝内胆管上皮细胞的作用①采用SPF级C57BL/6雌性小鼠,分别予pCS/pCG腹腔注射;②取小鼠肝脏组织HE染色观察小鼠肝内炎症情况;③取小鼠肝脏组织采用免疫组化观察肝内胆管上皮细胞变化情况;④取小鼠血清采用ELISA检测TGF-β、IFN-γ的表达;⑤取小鼠肝脏组织采用qPCR检测Caspase-1、Bcl-2的表达;⑥取小鼠肝脏组织采用western blotting检测Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。第二部分:研究体外pCS/pCG对人肝内胆管上皮细胞的作用①培养人肝内胆管上皮细胞(HIBEpiC),加入不同浓度pCS/pCG,观察细胞形态的变化;②采用CCK-8检测细胞活力;③采用流式细胞术检测HIBEpiC细胞周期的变化情况;④采用流式细胞术检测HIBEpiC细胞凋亡的情况。[结果]第一部分:pCS/pCG在动物体内促进肝内炎症,损伤肝内胆管上皮细胞①pCS组、pCG组肝脏汇管区淋巴细胞浸润,随着给药时间增加,炎症严重程度增加;②pCS组、pCG组给药第4W出现反应性小胆管增生;③pCS组、pCG组血清中炎性因子IFN-γ、TGF-β的表达随给药时间增加;④pCS组、pCG组肝脏中Caspase-1、Caspase-3及Bax的表达升高,Bcl-2的表达逐渐降低。第二部分:体外pCS/pCG通过促凋亡作用损伤人肝内胆管上皮细胞①加入不同浓度pCS、pCG,人肝内胆管上皮细胞形态发生明显改变;②加入不同浓度pCS、pCG,提示对人肝内胆管上皮细胞有一定毒性作用;③pCS、pCG阻滞人肝内胆管上皮细胞的S期;④pCS、pCG促进人肝内胆管上皮细胞的凋亡。[结 论]①pCS、pCG可导致小鼠肝内汇管区炎性细胞浸润,促进肝内炎症的发生发展;②pCS、pCG通过促凋亡作用损伤肝内胆管上皮细胞;③pCS、pCG促进小鼠肝内炎症与炎性因子IFN-γ、TGF-β的表达有关;④pCS、pCG对人肝内胆管上皮细胞具有一定的毒性作用;⑤pCS、pCG阻滞人肝内胆管上皮细胞的S期,并促进人肝内胆管上皮细胞的凋亡。