抑郁症和冠心病严重威胁人类身心健康,两种疾病相互关联,互为因果,相互影响各自的发生、发展及预后。抑郁症是冠心病进展的独立危险因素,抑郁会使冠心病患者病情加重,严重不良事件中死亡情况频发,预后恶化;而冠心病者又是抑郁症的高危人群。“双心治疗”逐渐为国内外临床医疗广泛应用。为探讨开心散对“双心疾病”(冠心病合并抑郁或抑郁合并冠心病)的作用机制,本文采用大鼠慢性不可预知性应激模型合并心肌缺血模型,研究观察开心散对大鼠体重、旷场得分、糖水偏嗜度和强迫游泳不动时间等行为学的影响;开心散对大鼠血清中CK和LDH的含量以及心电图、超声心动图、组织病理影响;开心散对大鼠血液和心脏组织中的SOD、MDA、CAT、GSH-PX、CRP、IL-6、TNF-α的影响以及对大鼠心脏中Bax和Bcl-2蛋白表达等的改善作用,以探讨开心散对抗抑郁同时保护心肌损伤的作用机制,以期为临床应用开心散治疗“双心疾病”(冠心病合并抑郁或抑郁合并冠心病)提供理论依据。目的:研究在大鼠慢性不可预知性应激模型(CUMS)的基础上,建立抑郁合并心肌缺血复合模型,以观察开心散对复合模型大鼠的抗抑郁作用同时对心肌细胞以及心脏功能的保护作用。采用分子生物学方法,从抗氧化、抗炎、抗细胞凋亡和蛋白表达等分子和细胞水平探讨开心散对“双心疾病”的作用机制。方法:1.开心散对抑郁合并心肌缺血大鼠受损心肌的保护作用研究采用慢性不可预知性应激(CUMS)方法建立大鼠抑郁症模型,给予开心散和阳性药(美托洛尔和艾司西酞普兰)连续灌胃21天,在给药的最后两天,连续腹腔注射异丙肾上腺素,造成大鼠心脏急性缺血,建立抑郁合并心肌缺血大鼠复合模型。以测定体重、糖水偏嗜度、旷场得分、强迫游泳不动时间等方法评价各组动物抑郁状态,采用行为学指标、心电图、超声心动图、病理组织切片及检测血清中CK和LDH的含量,以评价模型的合理性并探讨开心散对受损心肌潜在的保护作用及作用机制。2.开心散对心肌抗炎、抗氧化作用研究通过测定开心散对复合模型大鼠血液和心脏组织中的SOD、MDA、CAT、GSH-PX的含量影响,以及测定大鼠血清和心脏组织中CRP、IL-6和TNF-α的含量变化,以探讨开心散抗炎、抗氧化及对复合模型大鼠受损心肌细胞的保护作用机制。3.开心散抗大鼠心肌细胞凋亡以及对心脏Bax和Bcl-2蛋白表达量的影响采用Tunel法检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况;分别采用免疫组化法、Western blotting法测定各组大鼠心脏中Bax和Bcl-2蛋白的表达量,以探讨开心散对抑郁合并心肌缺血复合模型大鼠的受损心肌细胞的保护作用及抗细胞凋亡的作用机制。结果:1.开心散对抑郁合并心肌缺血复合模型受损心肌的保护作用实验结果显示,在抑郁模型基础上,腹腔注射异丙肾上腺素构建心肌缺血模型后,大鼠同时或兼出现呼吸困难、心率忽快忽慢、鼻腔出血的状态。实验结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠的旷场评分、糖水偏嗜度以及体重明显下降,游泳不动时间明显上升,组间比较具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,开心散给药组和阳性药组(艾司西酞普兰)可明显增加大鼠的旷场得分、糖水偏嗜度及体重,显著降低游泳不动时间,组间比较具有统计学意义(P<0.01);HE染色结果显示,注射异丙肾上腺素和生理盐水后,正常对照组大鼠心脏整体结构未见明显异常。心肌缺血模型组和抑郁合并心肌缺血复合模型组大鼠心脏内有广泛心肌细胞损伤、坏死,心肌纤维间隙疏松,心肌间纤维增生,可见疏松结缔组织,炎性细胞弥散性浸润,毛细血管增生,心肌细胞胞浆内可见空泡,部分肌浆溶解性坏死。与复合模型组相比,复合模型开心散组和阳性药(美托洛尔)组大鼠心肌病理得到明显改善。除正常对照组外,其余各组均在心电图和超声心动图上有着不同程度的变化。与正常组对比,心肌缺血模型组、复合模型组的EF和FS值显著下降,组间比较具有统计学意义(P<0.01);同时抑郁模型组的EF和FS值也低于正常对照组,组间比较具有统计学意义(P<0.01),但高于心肌缺血模型组和复合模型组;与正常对照组相比,心肌缺血模型和复合模型组的室间隔舒张末厚度(IVS;d)、室间隔收缩末厚度(IVS;s)、左心室后壁收缩末厚度(LVPW;s)、左心室后壁舒张末厚度(LVPW;d)显著增大(P<0.01);左心室舒张末内径(LVID;d)、左心室收缩末期内径(LVID;s)显著减小(P<0.01)。以上结果说明腹腔注射异丙肾上腺素造成明显的左心室心肌肥厚以及心肌损伤。与复合模型组相比,复合模型开心散组和复合模型美托洛尔组EF和FS值均有明显升高,组间比较具有统计学意义(P<0.01)。2.开心散对心肌抗炎、抗氧化作用的研究实验结果显示,与正常对照组相比,抑郁合并心肌缺血模型大鼠血清和心脏组织中的SOD、GSH-Px、CAT活力显著降低(P<0.01),MDA含量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,开心散各组可使大鼠血清和心肌组织中SOD、GSH-Px、CAT活力显著上升,MDA含量明显下降,组间比较具有统计学意义(P<0.01),提示开心散具有抗氧化作用。与正常对照组相比,抑郁合并心肌缺血模型大鼠血清和心肌组织中CRP、IL-6、TNF-α含量显著升高,组间比较具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,开心散各组能使大鼠血清和心肌组织中CRP、IL-6、TNF-α的含量下降,组间比较具有统计学意义(P<0.01),提示开心散具有抗炎的作用。以上结果显示开心散可通过抗氧化、抗炎等作用而保护受损心肌,这可能是开心散保护心肌细胞的作用机制之一。3.开心散对大鼠心肌细胞凋亡及心脏Bax和Bcl-2蛋白表达量的影响Tunel实验结果显示,正常组心肌细胞凋亡为8%。与正常对照组相比,各模型组心肌细胞凋亡指数明显增高,其中复合模型组高达38%(P<0.01)。与复合模型组相比,给药组大鼠心肌细胞凋亡指数均有明显下降,其中复合模型开心散组心肌凋亡指数为20%(P<0.01),说明开心散具有抑制心肌细胞凋亡保护心脏的作用。免疫组化结果显示,Bax蛋白在正常对照组中的阳性表达很少,复合模型组的阳性表达显著上升,胞浆中表达最高,呈黄棕色。与复合模型组相比,开心散给药组可明显减少心肌细胞中Bax蛋白的表达。以上组间比较均具有统计学意义(P<0.01和P<0.05);Bcl-2蛋白在正常对照组中高表达,在模型组的阳性表达显著下降。与模型组相比,开心散给药组可明显上调心肌细胞中Bcl-2蛋白的表达。以上组间比较均具有统计学意义(P<0.01和P<0.05)。结论:实验采用CUMS模型合并心肌缺血模型(复合模型),评价了开心散对抑郁合并急性心肌缺血模型的药理作用和机制,结果显示开心散在抗抑郁的同时,对心脏有一定的保护作用,其作用机制主要与提高抗氧化酶活力、抑制炎性因子表达、调控相关凋亡蛋白水平密切相关。此外,实验中发现抑郁模型组大鼠的各心肌指标也低于正常对照组,表明慢性应激对大鼠心脏产生了一定的影响,从而降低了抑郁大鼠的心肌功能,提示抑郁症可能是诱发心血管疾病的潜在危险因素。