古嘌苷(G~+)是一种广泛存在于古细菌中结构复杂的修饰核苷酸,它在几乎所有古细菌tRNA的D环中都有发现,其在稳定tRNA结构中起到了关键作用。大多数泉古菌拥有古嘌苷(G~+)却缺乏古嘌苷合成酶(ArcS),经研究发现,其具有两个行使与ArcS相同功能且能取代Arc S家族的蛋白质。二者之一即是与细菌QueF拥有同源性的QueF-like。人们在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中发现了QueF基因,并从细菌中克隆了QueF基因,解析出了其晶体结构,通过研究QueF的催化活性,发现QueF具有腈类还原酶活性和脒基转移酶活性,故认为QueF-like酶同样具有腈类还原酶活性和脒基转移酶活性。本研究的研究对象是以泉古菌Pyrobaculum calidifontis的QueF-like基因为依据而合成QueF-like酶的基因。采用DNA重组技术将编码QueF-like酶的基因序列插入到pET-28a(+)载体中,构建了重组表达载体pET-28a-QueF-like,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了QueF-like蛋白的可溶性表达,对QueF-like蛋白进行了纯化浓缩,通过光谱扫描和高效液相色谱两种分析方法对其催化活性进行分析,同时对QueF-like蛋白的两种酶活性反应条件进行了温度条件优化。实验结果显示QueF-like蛋白不仅具有腈类还原酶活性,而且具有脒基转移酶活性。此外,QueF-like酶的脒基转移酶活性催化反应时的最适温度为37℃,而腈类还原酶活性催化反应时的最适温度为30℃。该研究支持了同一隧道折叠(T-fold)超家族蛋白支架具有不同的催化活性这一说法,并为进一步研究QueF-like酶的催化活性以及其开发与利用打下了基础。