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目的1.检测少精子症患者与梗阻性无精子症患者的精子顶体完整性，分析其与辅助生殖治疗受精结果、胚胎发育、临床结局之间的关系，为少精子症与梗阻性无精子症患者的精子功能和形态学研究提供参考，并为这两类患者的辅助生殖治疗和顶体完整性检测的临床应用提供参考。2.检测少精子症患者与梗阻性无精子症患者的精子形态，探讨其与辅助生殖治疗受精结果、胚胎发育、临床结局之间的关系，为精子形态在这两类患者辅助生殖治疗上的作用提供参考。材料与方法1.精子标本与分组（1）少精子症组精子标本36例，为按照WHO精液分析手册(2010,第5版)两次及以上精液分析检测结果精子总数小于39×106/一次射精的男性。组内男方年龄33.5±5.8(28~39)岁，其配偶女方年龄32.0±5.1(27~37)岁。（2）梗阻性无精子症患者附睾精子组37例，取自进行皮下附睾抽吸术(PESA)-卵胞浆单精子注射(ICSI)的夫妇，通过检查诊断为梗阻性无精子症。组内男方年龄31.7±5.4(27~37)岁，其配偶女方年龄30.2±4.8(25~35)岁。（3）对照组34例，为同期进行辅助生殖治疗的与试验组年龄相近且精液常规分析中精子存活率、精子总数、精子活动力、精子形态都处于参考值范围内的男性。组内男方年龄32.9±4.2(29~37)岁，其配偶女方年龄31.0±3.7(27~35)岁。2.染色方法（1）按照第5版WHO精液分析手册，精子离心优选后制备精子涂片，取浓度为25μg/mL的异硫氰酸荧光素标记的豌豆凝集素(PSA-FITC)染料，于4℃湿盒中避光染色精子涂片待染区2h。用荧光显微镜于450nm~490nm激发光下评定精子顶体完整率(AIR)。（2）按照第5版WHO精液分析手册中的巴氏染色程序，将精子涂片进行染色，普通光镜下评估精子正常形态率(NFR)。3.体外受精少精子症患者和梗阻性无精子症患者按照广州医学院第三附属医院生殖中心操作常规进行体外受精(IVF)和ICSI，观察受精原核与胚胎发育情况。4.统计学方法数据以均数±标准差(mean±SD)或百分率(%)形式表示，以最接近的整数报告AIR与NFR。选用SPSS17.0进行统计分析，试验组与对照组之间AIR、NFR的比较采用独立样本t检验；χ~2检验比较试验组与对照组的受精率(FR)、卵子利用率(OUR)、可利用胚胎率(EAR)、优质胚胎率(OER)、胚胎种植率(IR)、妊娠率(PR)；分别将试验组内和对照组内AIR与FR、OUR、EAR、OER，NFR与FR、OUR、EAR、OER进行Spearman相关性分析。P＜0.05为差异有统计学意义。结果1.少精子症组精子顶体荧光染色结果中可观察到许多小顶体、锥形顶体和不规则顶体，对精子进行形态学评估时，可观察到多数小头、梨形头、锥形头、不定形头和尾部畸形；AIR少精子症组(27±15%)显著低于对照组(57±15%)(P＜0.01)；少精子症组的NFR(9±5%)显著低于对照组(18±9%)(P＜0.01)。2.梗阻性无精子症组的附睾精子中小头、锥形头、有空泡的头以及尾部卷曲精子增多，荧光显微镜下可观察到大量小顶体、不规则顶体和荧光染色不均匀的顶体。梗阻性无精子症组的AIR(20±7%)、NFR(8±2%)分别显著低于对照组(P＜0.01)。与少精子症组相比，梗阻性无精子症组的AIR显著降低(P＜0.01)、NFR组间无显著差异(P＞0.05)。3.分析试验组与对照组的ART治疗结果，少精子症组的FR(52.8%)显著低于对照组(84.2%)(P＜0.01)，OUR(28.5%)与对照组(47.5%)的相比显著降低(P＜0.01)，组间比较EAR(58.0%vs57.6%)、OER(29.9%vs26.7%)、IR(36.2%vs39.7%)和PR(62.1%vs54.5%)差异无统计学意义(P＞0.05)；梗阻性无精子症组的FR(61.5%)、OUR(32.4%)分别显著低于对照组的(P＜0.01)，两组间的EAR(53.6%vs57.6%)、OER(25.8%vs26.7%)、IR(24.6%vs39.7%)和PR(48.4%vs54.5%)差异无统计学意义(P＞0.05)。4.Spearman相关性分析结果显示，少精子症组AIR与FR(r=0.514,P=0.006)、OUR(r=0.359,P=0.028)，NFR与FR(r=0.551,P=0.042)、OUR(r=0.514,P=0.043)显著正相关；梗阻性无精子症组的AIR与FR(r=0.595,P=0.001)、OUR(r=0.349,P=0.037)，NFR与FR(r=0.463,P=0.004)、OUR(r=0.349,P=0.037)显著正相关；对照组中AIR与FR(r=0.680,P=0.003)、OUR(r=0.513,P=0.019)，NFR与FR(r=0.376,P=0.028)、OUR(r=0.420,P=0.013)显著正相关。少精子症组、梗阻者无精子症组、对照组组内AIR与EAR、OER无相关性(P＞0.05)，NFR与EAR、OER无相关性(P＞0.05)。结论1.少精子症患者的精子顶体完整性和精子形态差。精子顶体完整性会影响少精子症患者的IVF/ICSI结果，对胚胎发育和妊娠结局影响不大。提示少精子症患者若具有高精子顶体完整率和正常形态率，则进行体外受精时可获得高受精率。2.梗阻性无精子症患者较差的精子顶体完整性和精子形态影响了其PESA-ICSI的受精结局。具有高精子顶体完整率的梗阻性无精子症患者行ICSI能获得较好的受精结果。3.由于少精子症患者和梗阻性无精子症患者的精子质量差，患者进行辅助生殖治疗时受精率与卵子利用率低，但并不影响其妊娠率。