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目的:通过建立骨质疏松性闭合性骨折动物模型、建立体外骨痂培养体系,检测骨质疏松性骨折愈合过程中Ⅰ、Ⅱ型胶原及CTGF的表达,探讨中药骨康对Ⅰ、Ⅱ型胶原及CTGF的表达的影响,进一步探讨在骨质疏松背景下骨折的愈合的病理机制,并为防治骨质疏松性骨折提供新的策略。 方法:选择6月龄清洁级雄性SD大鼠80只,均造成闭合性骨折,随机分为四组,即空白组(A组)、骨康治疗组(B组)、睾丸切除组(C组)、睾丸切除+骨康治疗组(D组),每组20只。用10%水合氯醛按0.33ml/100g腹腔注射进行麻醉,剪开鞘膜后,分别将双侧睾丸与附睾分离,切除睾丸,模拟骨质疏松性动物模型,采用骨折发生装置造成闭合性骨折模型,两者结合,模拟骨质疏松性闭合性骨折动物模型,根据分组,术后B、D组灌服骨康溶液,灌胃给药容积为10ml/kg,A、C组按相同容积灌服生理盐水,分别在术后3天、7天、14天、21天处死,在无菌的环境下取出骨痂,于PBS+抗生素(硫酸庆大霉素、链霉素)溶液漂洗2次后,将每个骨痂样本均匀切成1mm大小,放入24孔的组织培养板中,每孔均含有1ml BGJb培养液,置于37℃、95%的空气、5%的CO2的条件下进行培养,24h后进行第一次换液,培养三天后,取出骨痂标本置于液氮冻存。用于以下三个方面的检测:1)用于化学染色,常规石蜡切片,脱蜡脱水,HE和MASSON染色,观察骨痂在不同时相不同干预措施的变化及差异。2)免疫组化,用于检测Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达。3)逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Westernblot),分别检测结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA和蛋白质的表达。 结果:1)造模:本次闭合性骨折造模,中段骨折占93.8%,横断骨折占91.3%,其可比性较好。2)骨痂不同时相生长及体外培养情况:骨痂培养体系建立成功,本次实验没有出现污染、组织坏死现象。第一时相(术后第3天),各组均可见断段有淤血块、肿胀,纤维连接,轻微可折断,各组之间无明显差异,B组血肿块相对较小,体外培养生长旺盛。第二时相(术后第7天),A、B、D组可见透明纤维软骨连接,呈竹结样,质地较软,B组平均体积较其他组别大,C、D组仍可见少量暗紫色血肿,机化,体外培养生长旺盛,显微镜下观察B组较其他组别分泌旺盛,A组其次,D、C组较慢,第三时相(术后第14天),C组呈现B组第二时相生长,B、A组骨痂可见钙化沉积显现,质地较硬,体外培养生长速度较第一、第二时相慢,第四时相(术后21天),B、A、D组可见骨样骨痂生长,C组呈现A组第三时相改变,显微镜下观察体外培养生长缓慢,分泌物减少。3)HE染色和MASSON染色:骨折后3天:骨折断端附近骨膜生发层细胞大量增殖,在骨折间