青黄散治疗骨髓增生异常综合征去甲基化作用效应机制研究

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第一部分青黄散对DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA影响研究目的:研究青黄散对骨髓增生异常综合征(MDS)患者甲基转移酶1(DNMT1)、甲基转移酶3a(DNMT3a)、甲基转移酶3b(DNMT3b) mRNA表达的影响。探讨外周血象改变与DNMT1、DNMT3a、DNMT3b变化之间的相关性,分析青黄散发挥疗效的作用机制。方法:应用实时定量PCR技术检测30例MDS患者应用青黄散治疗前后骨髓细胞DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA相对定量,分析DNMT1、DMT3a、DNMT3b mRNA的变化情况;从疗效角度分析有效组及无效组DNMTs的变化情况;探讨DNMTs mRNA水平与治疗前后外周血象改变之间的相关性;应用多元回归方法建立血象变化数值与DNMTs的回归方程,通过DNMTs mRNA含量预测血象的变化。结果:1.根据疗效判定标准对30例患者进行疗效评价,有效患者23人,无效患者7人,有效率为76.67%。2.对30例患者进行疗效评价,其中有效患者23例,治疗后Hgb、PLT明显升高(p<0.05);无效患者7例,治疗后WBC、Hgb、PLT、ANC与治疗前相比无明显变化(P>0.05)。3.23例有效患者治疗后DNMT1与治疗前相比明显下降(p<0.05),7例无效患者治疗后DNMTs未见明显改变(P>0.05)。4.有效组患者治疗前DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA相对含量较无效组低,经治疗后有效组患者DNMT1mRNA相对含量仍较无效组低(P<0.05)。5.WBC (?)台疗后变化数值与治疗前DNMT3a mRNA相对定量的对数呈负相关,两者相关系数R是-0.41;HgB治疗后变化数值与治疗前DNMT1、DNMT3a mRNA相对定量的对数呈负相关,相关系数R分别为是-0.57及-0.67;PLT治疗后变化数值与治疗前DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA相对定量的对数呈负相关,相关系数R分别是-0.47、-0.37及-0.62,与治疗后DNMT3a mRNA相对定量的对数呈负相关,相关系数R是-0.41。6.经过多元回归分析,筛选出治疗前Dnmt1敞为预测外周血象变化的指标,分别得出Hgb、PLT变化与治疗前Dnmt1的相对定量对数的预测回归方程。结论:青黄散能够抑制DNMT1mRNA的表达,通过降低甲基转移酶活性减少由SAM向DNA的甲基化过程,减轻了DNA甲基化,从而改善患者外周血象起到治疗作用。第二部分青黄散对S-腺苷甲硫氨酸循环代谢影响研究目的:研究青黄散对骨髓增生异常综合征(MDS)患者S-腺苷甲硫氨酸(SAM)代谢的影响。探讨外周血象改变与SAM及其代谢产物变化之间的相关性,探索青黄散去甲基化的作用机理。方法:应用Elisa方法检测54例MDS患者青黄散治疗前后外周血清SAM、S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)、同型半胱氨酸(HCY)的含量,分析SAM、SAH、HCY的变化情况;同时应用血细胞分析仪检测这54例患者治疗前后的外周血象,对入组患者进行疗效评价,从疗效角度及不同染色体核型对患者进行分组,分析不同组间SAM、SAH、HCY的变化情况;探讨SAM、SAH、HCY的变化水平与治疗前后外周血象改变之间的相关性。结果:1.根据疗效判定标准对54例患者进行疗效评价,有效患者35人,无效患者19人,有效率为64.81%。2.54例患者中有效患者35例,治疗后Hgb、PLT明显升高(p<0.05);无效患者19例,治疗后WBC、Hgb、PLT、ANC与治疗前相比无明显变化(P>0.05)。3.35例有效患者治疗后SAM含量并未见明显变化(P>0.05),SAH较治疗前下降(P<0.05),HCY较治疗前上升(P<0.05),SAM/SAH的比值较前上升(P<0.05),19例无效患者治疗后SAM、SAH、HCY、SAM/SAH未见明显改变(P>0.05)。4.将54例患者按不同染色体核型分为三组,比较组间SAM、SAH、HCY差异,经统计学检验,不同染色体核型组治疗前后SAM、SAH、HCY之间并无差异(P>0.05)。5.HgB治疗后变化数值与患者治疗前后HCY含量变化值呈正相关,两者相关系数R是0.33(P<0.05);PLT治疗后变化数值与患者治疗前后HCY含量变化值呈正相关,两者相关系数R是0.35(P<0.01)。结论:青黄散对SAM-SAH-HCY循环圈存在影响,由于青黄散对DNMT(?)表达量的影响导致了SAM向SAH的进一步代谢减弱,结果使SAM向DNA提供的甲基基团减少,降低了DNA的甲基化,从而改变MDS患者高甲基化状态起到治疗作用。
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