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目的:尿酸是嘌呤代谢的最终产物,是体内强大的抗氧化剂,同时在某些因素和条件下,又发挥着促氧化作用,因此其在机体中的作用非常复杂。临床研究显示,尿酸与胰岛素抵抗、肥胖、糖尿病等代谢性疾病密切相关,而目前缺乏相关的直接证据。骨骼肌源性胰岛素抵抗在疾病的发生发展过程中起重要作用,其中Irisin是新近发现的骨骼肌因子,而GLUT4是研究比较充分的葡萄糖转运蛋白,在胰岛素抵抗中起关键作用的因子。本研究通过观察尿酸及葡萄糖刺激小鼠C2C12细胞Irisin、GLUT4表达变化,以初步探讨尿酸对骨骼肌胰岛素抵抗的作用。方法:体外培养小鼠C2C12细胞,根据不同处理因素分为尿酸组和葡萄糖组:尿酸组共6组:0m M,0.1m M,0.2m M,0.3m M,0.4m M,0.6m M;葡萄糖组共3组:5.5m M,15m M,25m M。处理时间分别为0、24小时、48小时。1.应用RT-qPCR技术、Western Blot技术检测不同时间点、不同浓度尿酸刺激C2C12后细胞内Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表达。2.不同时间点、不同浓度尿酸对C2C12分泌Irisin的影响:应用ELISA技术检测细胞上清液中的Irisin含量。3.应用RT-qPCR技术、Western Blot技术检测不同时间点、不同浓度葡萄糖刺激C2C12后细胞内Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表达。4.不同时间点、不同浓度葡萄糖对C2C12分泌Irisin的影响:应用ELISA技术检测细胞上清液中的Irisin含量。5.初步机制探讨:应用RT-qPCR技术、Western Blot技术分别检测尿酸、葡萄糖刺激C2C12细胞PGC-1αm RNA和蛋白的表达水平。6.统计学方法:采用SPSS 19.0统计软件分析数据。结果用均数±标准差(`x±s)表示。两组以上比较采用单因素方差分析(ANOVA)。P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.尿酸组C2C12细胞内Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表达:尿酸处理C2C12细胞24小时及48小时,Irisin、GLUT4m RNA及蛋白的表达程度均呈先升高后降低的趋向,在0.3m M时达高峰,随后降低,24小时处理组趋势更明显,与正常对照组相比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。2.尿酸组C2C12分泌Irisin ELISA检测结果:不同浓度尿酸处理小鼠C2C12细胞24小时后,Irisin分泌量先升高后降低,在0.3m M时达高峰,随后逐渐下降,与正常对照组(NC)相比,差异有统计学意义(P<0.01);以不同浓度尿酸处理小鼠C2C12细胞48小时后,各处理组Irisin的含量无明显变化;差异无统计学意义(P>0.05)。3.尿酸组C2C12细胞内PGC-1αm RNA及蛋白表达:不同浓度尿酸处理C2C12细胞24小时及48小时后,PGC-1αm RNA及蛋白的表达水平均呈先升高后降低的趋势,在0.4m M时达高峰,随后逐渐下降,24小时处理组趋势更明显,与正常对照组相比,差异有统计学意义(均P<0.05)。4.葡萄糖组C2C12细胞内Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表达:不同浓度葡萄糖处理C2C12细胞24小时及48小时后,Irisin、GLUT4m RNA及蛋白的表达水平均呈逐渐降低的趋势,与正常对照组相比,差异有统计学意义(均P<0.01)。5.葡萄糖组C2C12分泌Irisin ELISA结果:以不同浓度葡萄糖处理C2C12细胞24小时及48小时后,Irisin的分泌量逐渐降低,与正常对照组(NC)相比,差异有统计学意义(P<0.01)。6.葡萄糖组C2C12细胞内PGC1-αm RNA及蛋白的表达:不同浓度葡萄糖处理小鼠C2C12细胞24小时及48小时后,PGC1-αm RNA及蛋白的表达水平均呈逐渐降低的趋势,与正常对照组相比,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:1.尿酸对C2C12细胞表达Irisin、GLUT4的影响具有双向性,可能通过PGC1-α来进行调节,但具体机制不详。2.随着葡萄糖浓度升高及作用时间延长,C2C12细胞表达Irisin、GLUT4的抑制作用增强,PGC1-α可能参与了此过程。