中国肿瘤登记年报显示,恶性肿瘤为人类死亡的首要诱因。肿瘤治疗已经成为医学界亟待解决的重要问题。而传统的肿瘤治疗方式包括放射治疗、细胞毒性药物治疗以及手术治疗,近年又研发出了针对特定靶点肿瘤靶向药物。2018年8月,FDA批准了首个siRNA干扰药物,靶向甲状腺素运载蛋白(TTR)基因,用于遗传性ATTR淀粉样变性成人患者治疗。使得小核酸治疗药物成为研究的热点。目前,临床上几种常见肿瘤发病率中,结肠癌已成为世界上第三大恶性肿瘤,也是第四大肿瘤死亡原因。本研究建立了一种制备工艺简单,结果可靠、适用于小核酸靶向递送载体。分为被动靶向载体(siRNA脂质体)和主动靶向载体(siRNA-HA脂质体),用于治疗结直肠癌,并对这两种载体体外效果进行相应研究。具体内容如下:(1)通过单因素工艺筛选确定使用的工艺,然后使用DOE设计(24-1+4中心点)构建空白脂质体;采用DOTAP、DSPC、Chol以及DSPE-PEG2000,根据粒径、PDI以及Zeta电位为指标确定空白脂质体最佳处方组成。(2)进行载siRNA脂质体的研究。DOTAP具有阳离子效应可以通过静电结合siRNA;Chol能填补脂质双分子层中空隙,保持结构稳定;DSPE-PEG2000使脂质体具有长循环;HA具有靶向CD44细胞作用。由于被动靶向脂质体制备简单,工艺可重现,而HA主动靶向脂质体负载HA,导致zeta电位呈负电性,载药量较低,故同时考察两种递送载体,为载体构建提供两种思路。通过比较包封率、粒径、PDI以及Zeta电位,确定了最终被动靶向载体(siRNA脂质体)和主动靶向载体(siRNA-HA脂质体)的组成。(3)对最终siRNA脂质体和siRNA-HA脂质体进行电镜形态观察,包封率检查以及血清稳定性及长期稳定性考察,最终进行细胞毒性和流式细胞凋亡试验。试验结果,制备得到的siRNA和siRNA-HA脂质体,粒径分别为130.75±0.87nm和192.53±4.29nm,siRNA-HA脂质体能明显观察到HA靶头;细胞毒性和流式细胞凋亡试验结果,证明对LOVO细胞具有基因沉默功能,效率在60%左右。证明制得的载体能够用来递送小核酸。