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枸杞叶含有丰富的生物活性成分,其中次生代谢产物黄酮的含量尤其丰富。本研究分析了一年到四年生五月至九月采摘的枸杞叶黄酮含量的变化以及对两种淀粉利用酶(α-淀粉酶,α-葡萄糖苷酶)的抑制活性,研究了五月份采摘的二年生枸杞叶片黄酮提取物(Extract of biennial goji leaves harvested in May,BMLE)的酶抑制类型,提纯并采用LC-MS鉴定了 BMLE的黄酮组成,利用分子模拟技术分析了黄酮与淀粉利用酶的结合能和作用机制。主要结果如下:(1)通过超声提取法获得八月份采摘的二年生枸杞叶粗提物,其多糖含量为5.57±0.34%,蛋白质含量为14.83±0.49%,多酚含量为12.37±0.31%。二年生八月份枸杞叶粗提物通过AB-8树脂串联聚酰胺树脂柱进行纯化,得到的提取物纯度达到73.1%,采用这种方法进行下一步的黄酮含量探究。(2)研究了枸杞叶黄酮的累积规律。一年到四年生五月至九月采摘的枸杞叶黄酮含量的总体范围为0.51±0.05至1.97±0.18 g/100g之间。一至三年生的叶用枸杞叶中黄酮物质含量较高(最高值约为1.9g/100g)且三年间差异不明显(P>0.05),生长周期达到四年时含量有所降低(最高值为1.52 g/100g);叶片中类黄酮含量与生长季有关,夏季初期(五月份)含量最高(最高可达1.97±0.18 g/100g),夏季末期逐渐下降(最低可达 0.51±0.05 g/100g)。(3)研究了一年到四年生五月至九月采摘的枸杞叶黄酮对两种淀粉利用酶的抑制活性,一年到四年生五月至九月采摘的枸杞叶黄酮提取物对α-淀粉酶抑制的IC50值范围为0.52至4.23 mg/mL,抑制α-葡萄糖苷酶的IC50值范围为1.25至4.73 mg/mL,这说明枸杞叶黄酮对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶都有很强的抑制作用。同时发现BMLE对两种淀粉利用酶抑制效果最好(抑制α-淀粉酶的IC50值为0.52 mg/mL,α-葡萄糖苷酶的为1.25 mg/mL),结合黄酮含量选取了该枸杞叶片进行后续研究。(4)通过酶抑制动力学实验可知BMLE对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制类型都为竞争性抑制,说明BMLE和底物都可以结合到酶的活性中心。BMLE抑制两种淀粉利用酶的Ki分别为9.19 mg/mL(α-淀粉酶)和11.77 mg/mL(α-葡萄糖苷酶),这说明BMLE与α-淀粉酶有较高的亲和性。(5)通过LC-MS鉴定BMLE黄酮组成。鉴定结果为11种黄酮类化合物,其中有3个黄酮苷(芸香苷,柚皮苷,槲皮苷)和8个黄酮苷元(儿茶素,异鼠李素,山奈酚,木犀草素,桑色素,杨梅素,柚皮素,槲皮素)。在提取物中也检测到11种酚酸,包括4-羟基肉桂酸,咖啡酸,绿原酸,没食子酸,龙胆酸,4-羟基苯甲酸,迷迭香酸,芥子酸,丁香酸,香草酸,对茴香酸。(6)计算机模拟研究了上述黄酮化合物与两种淀粉利用酶的结合方式,发现11种类黄酮化合物通过与酶的活性中心结合,从而与底物构成竞争关系,并且与两种淀粉利用酶的结合能和阿卡波糖结合能(-8.1 kcal/mol和-9.6 kcal/mol)较为接近,表明这些黄酮化合物具有良好的酶活抑制效果。综上所述,枸杞叶片中黄酮物质含量与生长时长及月份相关,根据黄酮含量以及酶活抑制效果判断出枸杞叶的最佳收获时间是二年生五月份。这项研究也表明枸杞叶片可能通过抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性来达到降血糖效果。因此,枸杞叶可以作为一种良好的黄酮资源来进行开发,为糖尿病患者控制血糖提供更多有效途径。