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近年来从海藻中分离的多糖引起了越来越多的关注。据报道,来自海藻的硫酸多糖具有抗氧化、抗炎抗肿瘤等活性且毒副作用少等特点,因此,在化妆品、功能性食品等行业具有广阔的应用前景。大石花菜含有大量的碳水化合物,目前主要用于直接食用和琼胶的提取,综合利用程度不高,研究报道也相对较少。本课题完善了大石花菜的研究,为后续多糖的分离及生理活性的研究提供理论依据。本文总结了大石花菜多糖的研究概况,探索了从大石花菜中分离多糖的方法和最佳工艺条件,对纯化后的多糖进行了结构鉴定,并评估大石花菜多糖的抗炎活性。本课题采用超声辅助提取法提取大石花菜多糖。与水提法相比,超声辅助提取法的多糖提取率更高并且大大节省了提取时间,因此,选取超声辅助提取法提取大石花菜多糖。通过单因素、响应面实验得到大石花菜粗多糖提取的最佳工艺条件是:超声温度85℃、超声时间50 min、液料比36 mL/g,多糖得率约为31%。粗多糖经三氯乙酸法脱蛋白、透析、冻干后即可用于纯化处理。纯化过程分别采用纤维素离子交换柱(DEAE-52)、葡聚糖凝胶柱(Sephadex G-100),用0.3 mol/L NaCl溶液洗脱,洗脱液透析后冻干即得大石花菜纯多糖,将其命名为GPOP-1。多糖GPOP-1理化性质的研究通过硫酸-苯酚法、BCA法、硫酸-咔唑法、硫酸钡比浊法分别对其总糖含量、蛋白含量、糖醛酸含量、硫酸根含量进行测定。GPOP-1的总糖含量为88.93%,糖醛酸含量为19.76%,硫酸根含量为8.80%,基本不含蛋白。GPOP-1的单糖组成主要为木糖、半乳糖、半乳糖醛酸摩尔比为1:8.41:2.79,其重均分子量Mw为28807 Da。红外光谱(FT-IR)也显示多糖GPOP-1中含有糖醛酸和硫酸根。经上述分析及核磁共振波谱(NMR)综合分析得到:GPOP-1由糖残基1,4-α-D-Galp3S,1,2-α-D-Xylp,1,3-β-D-GalpA依次连接成单元结构组成,结构式如下:大石花菜多糖体外抗炎活性研究主要通过建立由脂多糖(LPS)诱导的THP-1细胞模型,分别进行细胞活性实验(MTT)、NO分泌量测定、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印记实验(West Blotting)探究其抗炎活性。研究表明,多糖GPOP-1浓度达到5μg/mL时,能够完全保护细胞免受LPS诱导的细胞毒性的侵害。NO释放量的检测初步证明了5μg/mL的多糖GPOP-1能够显著抑制LPS诱导产生的炎症反应。因此,将多糖浓度设定为5μg/mL,用于下面探究。RT-PCR和免疫印迹进一步研究了多糖GPOP-1对炎症信号通路中炎症因子TLR4,MyD88and TRAF6在mRNA及蛋白水平表达的影响。结果表明,5μg/mL多糖能够显著下调LPS诱导的三个炎症因子在mRNA水平的表达。该浓度多糖也能够显著降低LPS诱导的三个炎症因子在蛋白水平的表达量,并且多糖GPOP-1显著下调LPS诱导的三个炎症因子表达的效果在mRNA及蛋白水平上相似,证明了结果的可靠性。因此,大石花菜多糖具有良好的抗炎活性。