论文部分内容阅读
背景与目的:消化道癌是最常见的恶性肿瘤之一,化疗是对其治疗的必要辅助手段,而耐药性的产生则是化疗失败的主要原因。多年来人们一直在寻找抑制和逆转肿瘤细胞耐药性的方法,但仍没取得令人满意的结果。其重要原因是肿瘤细胞耐药性产生的机制尚不清楚。肿瘤细胞耐药性的产生涉及到耐药、癌、抑癌、细胞周期、凋亡、错配修复等多种基因及蛋白表达的变化,是一个多因素参与的复杂过程。目前研究较多的是耐药相关蛋白,主要有多药耐药基因蛋白(P-gp)、肺耐药相关蛋白(LRP)、谷胱甘肽 S 转移酶(GST-π)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)等。它们通过降低细胞内药物浓度、药物毒性或改变药物作用靶点等机制参与耐药性产生。错配修复系统的功能是维持 DNA 复制的高度保真性和遗传物质的完整及稳定性。错配修复基因功能缺失时,细胞常会因基因突变聚集而表现为遗传不稳定。近年来,许多人开始关注错配修复蛋白在肿瘤细胞耐药性产生中的作用,并发现错配修复功能缺失与肿瘤细胞对烷化剂和铂类等药物的耐受产生有关。本研究通 过 检测 消 化道 癌 组织 、 胃癌 细 胞株 BGC823 及其耐 药 株BGC823/cDDP 对 5 种常用化疗药的敏感性和耐药相关蛋白 LRP、GST-π及错配修复蛋白 hMLH1、hMSH2 的表达,探讨消化道癌耐药性产生的机制。 材料与方法:1、MTT 法测定 23 例消化道癌癌细胞对顺铂、卡铂、·2·5-氟尿嘧啶、长春新碱、丝裂霉素 5 种化疗药物的耐受性;免疫组织化学方法检测它们的耐药相关蛋白LRPG、ST-π及错配修复蛋白hMLH1、hMSH2 表达;分析癌组织细胞对化疗药物耐受性与四种蛋白表达之间的关系。2、细胞培养及逐步递增顺铂浓度、间歇作用体外诱导法建立耐药细胞株 BGC-823/cDDP;MTT 法检测耐药细胞株对顺铂、5-氟尿嘧啶、长春新碱的耐药性;免疫细胞化学方法检测耐药株和亲本株上述 4种蛋白的表达。结果:1、癌与癌旁组的 LRP 阳性率分别为:74%与 65%;GST-π则为 73%与 59%,两组间均无显著差别,但均表现出显著相关关系(P<0.05);癌组织中两蛋白表达未见显著相关关系。癌组 hMLH1 阳性率(57%)显著高于癌旁组(23%)(P<0.05);癌组 hMSH2 阳性率(74%)与癌旁组(59%)无显著差别,但其在两组的表达显著相关(P<0.05);hMLH1 与 hMSH2 在癌组织的表达未见显著相关关系;癌组织耐药相关蛋白 LRP、GST-π与错配修复蛋白 hMLH1、hMSH2 均未见显著相关关系。2、GST-π阳性率在卡铂中度耐药组(100%)显著高于敏感组(50%)(P<0.05),而在另 4 种化疗药则均无显著差别;LRP、hMLH1、hMSH2 阳性率对同一种化疗药敏感程度不同的肿瘤组织均无显著差别;对丝裂霉素随耐药程度的增强,肿瘤组织耐药相关蛋白表达类数增多(P<0.05),而对另 4 种化疗药物,耐药程度与肿瘤组织耐药相关蛋白表达类数无关;对 5-氟尿嘧啶,肿瘤组织耐药程度与错配修复蛋白阳性率呈显著负相关(P<0.05),而对另 4 种化疗药物,其耐药程度与错配修复蛋白表达无关。3、细胞株 BGC-823/cDDP 对顺铂、5-氟尿嘧啶、长春新碱的耐药指数分别是 3.93、1.87、2.03;四种蛋白在 BGC-823与 BGC-823/cDDP 两细胞株均有表达,其中 LRP、GST-π、hMSH2 在BGC-823/cDDP 的表达强于亲本株 BGC-823,而 hMLH1 蛋白表达强度在两种细胞间无显著差异。结论:1、化疗药物作用前,癌细胞与其发生母地组织之间 LRP、GST-π蛋白阳性率常无显著差别,但宿主间则存在差别。2、化疗药物作用前,消化道癌癌细胞均可有 LRP、GST-π表达,其表达程度与癌细胞对顺铂、卡铂、丝裂霉素、5-氟尿嘧啶原发性耐药有关;化疗药物