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目的探讨人乳腺癌中催乳素(prolactin,PRL)与催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)信号通路相关的micro RNA(mi RNA)表达谱,对差异表达的mi RNA和novel mi RNA分子进行实验验证及生物信息学分析,并从细胞水平深入研究mi R-449c-5p分子在乳腺癌发生发展中的作用机制。方法人重组PRL处理PRLR高表达的人乳腺癌细胞系T-47D,利用Solexa高通量测序技术构建PRL处理组和未处理组的T-47D细胞的小RNA库,分析PRL处理前后细胞中mi RNA差异表达情况,从中选择4个mi RNA分子(mi R-449c-5p,mi R-16-5p,mi R-15b-5p和mi R-193a-3p)利用实时荧光定量PCR法进行验证,并利用生物信息学软件进行靶基因预测,以及GO(Gene Ontology)富集分析及KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析。同时对所获得的3个novel mi RNA分子(命名为novel-mi R-01,02,03)通过RT-PCR法进行表达验证,并进行靶基因预测和GO、KEGG分析。同时,选择两组间的表达有明显差异的mi R-449c-5p分子,进行靶基因预测和双荧光素酶报告基因验证,利用mi R-449c-5p mimic转染T-47D细胞,结合荧光定量PCR,Western blot实验分析mi R-449c-5p过表达后细胞内相关分子的表达,并通过transwell迁移实验和细胞划痕愈合实验在细胞水平研究其与乳腺癌发生发展的关系。结果成功构建了PRL处理组和未处理组的人乳腺癌T-47D细胞mi RNA表达谱,分别获得821个和798个mi RNAs成熟体,其中428个呈共表达,42个为明显差异表达,实时荧光定量PCR验证了4个有明显差异表达的mi RNA分子,其细胞内表达变化与Solexa高通量测序结果完全一致。两组mi RNA表达谱中分别检测出86个和115个novel mi RNAs成熟体,其中46个novel mi RNAs在两个库中共表达。根据细胞内的表达量选择了3个共表达的novel mi RNAs进行了RT-PCR表达验证,结果显示两组细胞均呈不同程度的表达。对4个已知mi RNAs和3个novel mi RNAs的靶基因进行GO、KEGG功能富集分析,提示相关靶基因主要分布于细胞核、胞浆和细胞膜上,其功能主要参与细胞内转录调控、翻译调控及细胞增殖等,涉及JAK-STAT和MAPK等信号通路,与PRLR信号途径密切相关。软件预测PRLR为mi R-449c-5p的靶基因,并进行了双荧光素酶报告基因验证,实验证实mi R-449c-5p的过表达能有效抑制乳腺癌T-47D细胞的迁移。结论利用Solexa高通量测序技术成功构建人乳腺癌T-47D细胞mi RNAs表达谱文库,获得了一系列与PRLR信号通路密切相关的mi RNAs分子,初步证实PRLR为mi R-449c-5p的靶基因,且在乳腺癌中发挥抑癌基因的作用。本研究为深入探讨该mi RNA分子在乳腺癌发生和发展中的作用奠定了重要的基础。同时,也证明了高通量测序是一项检测组织细胞mi RNAs表达的较理想分析技术。