论文部分内容阅读
结核病(Tuberculosis,TB)是威胁全球人类健康的重大传染病。流行病学调查研究结果表明,结核病发病具有地域和民族异质性的特点,其中我国少数民族结核病的流行程度高于全国平均水平,遗传因素可能是影响TB发病的因素之一。蒙古族是我国少数民族之一,主要聚居区在我国北部的内蒙古自治区,属于结核病高发地区,结核病防治工作仍然面临严峻挑战。明确蒙古族结核易感性的相关因素,识别高危人群是制定有效遏制结核病高发态势的前提。本研究以识别蒙古族人群结核病患病易感因素为出发点,基于病例-对照研究设计,通过基因转录水平和基因突变角度,探讨ASAP1、NRAMP1和SP110三个基因表达水平与蒙古族结核病易感性的关联。并在此基础上,进一步探讨ASAP1、NRAMP1和SP110等基因的单核苷酸多态性与结核病易感性的相关性,为针对性制定结核易感人群的防治措施和技术手段提供新的理论依据。1.研究对象的基本信息收集和标本采集根据《中华人民共和国卫生行业标准肺结核诊断标准(WS 288-2017)》,通过伦理审查并征得病患和健康志愿者同意,采集我国内蒙古自治区的蒙古族和当地汉族结核病人群和健康对照的血液标本。蒙古族血液标本共414例,其中结核病患者197例,健康对照217例。汉族血液标本共131例,结核病患者56例,健康对照75例。对比结核病患者和健康对照组间社会人口学特征显示,除性别比例存在组间差异外,两组间人群年龄,吸烟和饮酒等特征相近,即与结核患病无统计学关联。2.基因表达水平与蒙古族结核病易感性的相关性分析基于病例-对照研究设计,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法,检测受试对象外周血中ASAP1,NRAMP1和SP110 mRNA表达水平,并分析不同民族间、结核病和健康对照组间mRNA表达水平的差异。结果表明:蒙古族人群内,结核患者ASAP1,NRAMP1 mRNA表达水平明显高于健康对照人群(P值均<0.05),且女性结核病患者SP110的mRNA表达明显高于健康患者(P<0.05)。汉族人群内,结核病患者NRAMP1表达水平高于健康对照组(P<0.05),但是这种差异模式在ASAP1,SP110并不明显。因此,ASAP1、NRAMP1和SP110 mRNA表达与人群结核病易感性相关,而且这种相关性在蒙古族人更为明显。3.基因单核苷酸多态性与蒙古族结核病易感性的相关性分析采用基于二代测序法并结合多重PCR技术的高通量SNP分型法,检测易感性关联基因ASAP1、NRAMP1、SP110、TLR2和TLR4的28个SNP位点,探讨其与结核易感性的关联。结果表明ASAP1选取的rs10956514、rs4733781、rs2033059、rs1017281、rs1469288和rs17285138在蒙古族中结核病和健康对照中未发现显著性差异,由此推断在当前样本规模中ASAP1与蒙古族结核病易感性不相关。NRAMP1D543N(rs17235409)等位基因A相对于等位基因G在蒙古族中患肺结核的风险增加,3’UTR(rs17235416)、INT4(rs3731865)和rs2276631在蒙古族中结核病和健康对照中未发现显著性差异。SP110基因多态性位点rs9061与蒙古族肺结核易感性具有相关性,rs9061等位基因T相对于等位基因C患结核的风险增加,在隐形模型中,T/T基因型与肺结核的发生呈正相关,T/T基因型是蒙古族肺结核发病的危险因子。rs722555等位基因C相对于等位基因T患肺结核的风险降低;rs3948464等位基因G相对于等位基因A患肺结核的风险增加;rs11679983等位基因A相对于等位基因G患肺结核的风险增加。TLR2 rs3804100等位基因C相对于等位基因T患肺结核的风险增加;rs3804099等位基因C相对于等位基因T患肺结核的风险增加。TLR4 rs11536889等位基因C相对于等位基因G患肺结核的风险增加;rs10759932等位基因C相对于等位基因T患结核的风险增加;rs10759931等位基因A相对于等位基因G患肺结核的风险增加。以上研究表明,蒙古族和汉族结核病的发病存在人群易感性,人群的易感性与宿主基因ASAP1、NRAMP1和SP110等基因的位点突变(NRAMP1 rs17235409,SP110 rs9061、rs722555、rs3948464和rs11679983,TLR2 rs380410和rs3804099,TLR4 rs11536889、rs10759932和rs10759931)和转录水平的改变有关,依据该发现将有助于从表面健康的人群中,尤其是蒙古族,早期识别罹患结核病的高风险人群,进行针对性预防,控制结核病的发病率;同时识别早期潜伏感染者,转诊后进行早诊断、早治疗和降低结核病的死亡率。