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冬虫夏草是我国的传统中药,中国拟青霉(Paecilomyces sinensis)是冬虫夏草中分离的一个无性型菌株,并且中国拟青霉在形态学、药理学及化学成分方面与天然冬虫夏草非常相似。本研究从中国拟青霉中分离出了具有生物活性的大分子均一糖肽,并对其结构、生物活性进行了研究。 本课题采用液体发酵法得到中国拟青霉菌丝体,干燥后的菌丝体通过水提醇沉法提取,分离除蛋白后得到分子量均一的糖肽粗品CPS-Ⅰ,其糖含量为71.3%。凯氏定氮法检测了CPS-Ⅰ蛋白质含量为19.1%。CPS-Ⅰ通过葡聚糖凝胶分离纯化之后得CPS-Ⅱ。通过高效液相色谱、核磁共振氢谱、炭谱、红外光谱等分析检测CPS-Ⅱ,检测结果表明CPS-Ⅱ为一种大分子糖肽。通过旋光仪测得其比旋光度+35°,表明不对称性比较低。应用高效液相色谱、气相色谱、红外光谱和核磁共振、高碘酸氧化和Smith降解、甲基化等方法测定CPS-Ⅱ一级结构,结果表明CPS-Ⅱ主要以1→3、1→4连接葡萄糖和半乳糖为主链,还有1→2,3,6连接葡萄糖,1→3,6连接甘露糖,1→6连接半乳糖。圆二色谱法分析糖肽构象得出:中国拟青霉菌丝体糖肽能与刚果红发生络合,是具有(+) cotton效应的α-螺旋结构,含有较多的螺旋、转角结构。 采用MTT法评价了CPS-Ⅱ细胞抗肿瘤活性,应用DPPH法和Fenton法检测了CPS-Ⅱ的抗氧化性。结果表明CPS-Ⅱ对HepG2细胞的半抑制浓度(IC50)为526μg/mL;CPS-Ⅱ清除DPPH·的能力为18.2%,CPS-Ⅱ浓度为0.1mg/mL时羟基自由基清除率为17.2%。 本文首次从中国拟青霉菌丝体中分离出糖肽,并进行了结构表征和生物活性评价。丰富了虫草生物活性物质的研究内容。