口腔粘结修复随着粘结剂的发展得到广泛应用。但牙本质粘结耐久性的问题仍然不容乐观。口腔各种酶、细菌等多种因素会导致粘结界面破坏,影响牙本质粘结稳定性。纳米渗漏是影响粘结耐久性的常见原因。纳米渗漏是在混合层与正常牙本质之间形成的以纳米尺度计量的微小孔隙。口腔中各种细菌的代谢产物如酸、酶等以及水分能够进入此孔隙,进一步导致粘结界面的降解。渗入到粘结界面内的各种成分通过以下原因影响粘结耐久性:(1)水分的存在会使树脂水解降解,加速单体析出(2)某些细菌产酸,能够激活基质金属蛋白酶活性,导致界面中裸露胶原纤维的降解。实验目的:本实验应用激光共聚焦显微镜技术,通过老化试验,从纳米渗漏的角度,对不同时间点的不同浓度EDC对牙本质粘结界面的微观形态进行比较、分析,为临床提高牙本质粘结效果提供实验依据。实验方法:收集一个月内拔除的新鲜无龋磨牙100颗。根据涂布预处理剂种类随机分为5组(n=20),分别为实验组(A)0.3mol/L EDC、(B)0.5mol/L EDC、(C)1mol/L EDC组,阳性对照组(D)氯己定组,空白对照组(E)PBS组。各组完全去除牙合面牙釉质,600目碳化硅砂纸打磨牙本质表面,35%磷酸酸蚀后,预处理牙本质表面60s,行粘结树脂修复。以上5个实验组根据不同老化条件再随机分为1、2两个小组(n=10):1组用于即刻纳米渗漏测定,2组用于老化后纳米渗漏测定。老化组所有标本经冷热循环后浸泡于罗丹明B染液中,并放置于37℃恒温水浴箱24h,而未老化组则在粘结完成24h后直接进行染色处理。所有标本用低速切割机在流水下平行于牙体长轴进行片切,10组样本分别打磨至透光后在激光共聚焦显微镜下观察、测量并记录。实验结果:在未老化组中,与两对照组相比,使用碳二亚胺水溶液对粘结界面即刻的纳米渗漏长度均有所降低,但实验组及对照组样本测得的纳米渗漏长度之间无显著差异(P>0.05)。在冷热循环5000次后,实验组与各对照组之间存在一定的统计学差异(P<0.05)。其中,1M组的纳米渗漏长度值最高。与氯己定组相比,0.3M及0.5M组对纳米渗漏的抑制作用无明显改善;1M组在本试验中促进了纳米渗漏的发生,差异具有统计学意义。另一方面,与PBS组相比,0.3M组在一定程度上减缓了纳米渗漏的发生,但组间无统计学差异(P>0.05);0.5M及CHX组对于纳米渗漏有较强的抑制作用,其差异有统计学意义(P<0.05),两组间无明显区别;1M组增加了纳米渗漏,无统计学差异。而与未老化组相比,所有实验组在老化后纳米渗漏长度均有所增加。增加程度由大到小依次是1M组、PBS组、0.3M组、CHX组、0.5M组。结论:1.碳二亚胺作为MMPs抑制剂及胶原交联剂,较之氯己定阳性对照组,在未老化组及老化组中纳米渗漏长度均有所增加,其中除老化条件下1M组纳米渗漏的增加具有统计学差异外,其余无显著性差异。因此EDC对于抑制纳米渗漏发生的有效性与氯己定相比无改善作用。2.碳二亚胺作为MMPs抑制剂及胶原交联剂,与PBS空白对照组相比,在未老化组中除1M组外均减少了纳米渗漏。各组纳米渗漏长度之间无明显统计学差异;在冷热循环5000次后,0.5mol/L碳二亚胺的预处理减缓了纳米渗漏;0.3mol/L和1mol/L则作用不明显,对纳米渗漏的发生无明显影响。