桂花(Osmanthus fragrans)具有较为特殊的开花过程和机制,成花转变、花芽分化和花开放均受到环境温度的影响。环境相对低温能够显著促进桂花花芽分化进程,同时也调控花开放过程。观察了不同温度处理(25℃和19℃)对‘堰虹桂’花芽分化进程的影响,克隆得到7个SVP基因,并分析了这7个SVP基因及其4个下游相关基因在花芽分化进程中的表达模式,探究相对低温影响花芽分化的机制以及SVP基因的作用;同时,分析3个扩展蛋白基因OfEXPLA1、OfEXPA2和OfEXPA4的功能和作用,以明确其在相对低温调控花开放中的作用机制。主要研究结果如下:1.相对低温对花芽分化进程的影响:在不同温度处理(25℃和19℃)中,相对低温处理(19℃)可使‘堰虹桂’提前进入花芽分化,并且能加快整个花芽分化进程。其中受到相对低温影响最为显著的是花序分化期和雌蕊分化期,花序分化期缩短18 d,雌蕊分化期缩短26 d。2.OfSVP基因的克隆及其表达模式分析:从桂花中克隆得到7个SVP基因,ORF finder在线分析发现4个基因(OfSVP1,OfSVP3,OfSVP4,OfSVP5)具有完整的cDNA序列,OfSVP2、OfSVP6和OfSVP7基因5′端存在缺失。7个SVP基因氨基酸序列进行比对分析,OfSVPs具有SVP的主要保守特征,包括N端含有MADS-box、K-box和I-box基序,以及不保守C末端,系统进化树分析表明7个OfSVP基因分别属于2个亚族。对7个SVP基因和其他4个SVP下游基因进行荧光定量表达分析,OfSVP4/6/7在花芽分化过程中在相对低温条件下下调表达,而OfSVP1上调表达,OfSVP2/3/5的表达量在不同温度下没有显著差异。FT、SOC1和GA20ox2在19℃处理下的表达量基本上高于25℃处理,与OfSVP4/6/7表达呈显著负相关。OfSVP4/6/7说明可能响应低温促进花芽分化,其可能通过调控FT、SOC1以及GA20ox2而影响花芽分化进程。3.扩张蛋白OfEXPLA1、OfEXPA2和OfEXPA4的功能分析:构建得到3个35S::OfEXPLA1-GFP、35S::OfEXPA2-GFP和35S::OfEXPA4-GFP重组植物表达载体,然后转入洋葱表皮细胞内,发现OfEXPLA1、OfEXPA2和OfEXPA4蛋白的绿色荧光信号都定位在细胞壁上。通过改进后的花序侵染法获得转桂花OfEXP基因启动子的拟南芥株系,通过表型观察发现3种转基因株系的叶片平均长度和平均宽度都长于野生型,OfEXPLA1和OfEXPA4启动子转基因拟南芥株系的平均花序长度长于野生型,其花序数量也多于野生型。OfEXPA2启动子转基因拟南芥株系的花序长度和数量与野生型比较,没有显著差异。