目的:OAZ1(Ornithine Decarboxylase Antizyme1,鸟氨酸脱羧酶抗酶1)是多胺诱导的一种能负反馈调控多胺合成和多胺运输的蛋白,通过多种途径在多胺代谢内外发挥着抗肿瘤效应,可望成为抗肿瘤治疗的新靶点。目前,没有市售的OAZ1单抗。购买的OAZ1多抗价格昂贵、特异性差,不能满足实验需求。本课题计划制备 HOAZ1(Homo sapiens Ornithine Decarboxylase Antizyme1,人鸟氨酸脱羧酶抗酶1)的多克隆抗体和单克隆抗体,为进一步研究 HOAZ1的新功能和抗肿瘤机制奠定基础。　　方法:(1)用巢式-PCR和重叠延伸-PCR克隆 HOAZ1基因的+1移码位点 T205缺失突变的开放性阅读框 DM-HOAZ1和S-HOAZ1,分别构建原核表达质粒和真核表达质粒。(2)将原核表达质粒转化 Rosseta(DE3),用IPTG诱导目的基因表达。通过超声裂解和SDS-PAGE检测重组蛋白的可溶性。经 Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白, SDS-PAGE检测纯化情况,Western Blotting鉴定重组蛋白。(3)将纯化并透析、浓缩的HOAZ1重组蛋白免疫 Balb/C小鼠,取效价最高的小鼠血清作为多克隆抗体。分离该小鼠脾细胞,并与骨髓瘤细胞 SP2/0融合。通过 HAT选择性培养基培养、间接 ELISA法筛选、用有限稀释法单克隆化,获得稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株。将阳性单克隆细胞移植至小鼠腹腔,收获腹水上清作为单克隆抗体。用间接 ELISA检测抗体的效价,Western Blotting检测抗体的特异性。(4)将制备的抗体应用于 Western Blotting,检测真核细胞中瞬时表达和本底表达的HOAZ1蛋白。　　结果:利用PCR定点诱变和基因工程技术成功构建了无需+1RF翻译就能连续编码长短两型 HOAZ1蛋白的表达质粒。经原核表达包涵体形式和可溶性形式的6×His重组蛋白,并用Ni-NTA亲和层析分别在变性条件和天然条件下纯化获得纯度在80％以上的两种异型体蛋白,纯化的蛋白兼有6×His及OAZ1抗原表位。将变性条件下纯化并透析、浓缩的HOAZ1全长型重组蛋白作为抗原免疫 Balb/C小鼠、天然条件下纯化的HOAZ1全长型重组蛋白作为间接 ELISA的包被抗原,制备获得抗血清形式的多抗和阳性杂交瘤细胞株2F3G2A5腹水上清形式的单抗,效价分别为1:256000和1:8000。多抗和单抗均不是6×His标签抗体,均能用于 ELISA和Western Blotting检测原核表达的长短两型蛋白,并能用于 Western Blotting检测真核细胞中瞬时表达和本底表达的HOAZ1蛋白。　　结论:本研究制备了HOAZ1的抗体,能用于检测原核表达和真核表达的HOAZ1长短两型蛋白,为进一步研究 HOAZ1的新功能及其抗肿瘤机制提供了重要的实验材料。