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目的:1.探究INPP4B(inositol polyphosphate-4-phosphatase,type-II)在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞系及初治MM临床骨髓样本中恶性浆细胞的表达情况;探究INPP4B在髓外浆细胞瘤组织中的表达情况。2.探究INPP4B的低表达是否与MM的临床预后相关。3.探究INPP4B的过表达是否影响MM骨髓瘤细胞的增殖及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达变化,从而明确INPP4B表达变化对于MM细胞增殖的影响及其相关可能机制;探究INPP4B的过表达对于细胞周期的影响及周期相关蛋白Cyclin D1的表达变化。方法:1.qPCR的方法检测MM临床初治标本中INPP4B的m RNA表达水平:以2011.1-2016.1期间的28例初治MM骨髓磁珠分选恶性浆细胞为研究对象,以正常供者骨髓浆细胞为对照,采用qPCR的方法检测28例初治MM患者骨髓恶性浆细胞中的INPP4B表达水平。2.IHC法检测髓外浆细胞瘤组织中INPP4B的表达情况:以2010.1-2015.12期间的42例髓外浆细胞瘤组织为研究对象,以乳腺癌阳性及阴性染色为对照,采用IHC法检测髓外浆细胞瘤组织中INPP4B的表达水平。3.Western Blot法及qPCR法检测MM细胞系中INPP4B的蛋白及m RNA水平:以7种MM细胞株LP-1、OPM-2、RPMI 8226、U266、H929、MM.1S、MM.1R为研究对象,采用Western Blot法及qPCR法检测7种MM细胞系中INPP4B的蛋白及m RNA水平。4.通过病毒感染的方法过表达MM细胞的INPP4B水平:由于U266及H929病毒感染效率较低,故以3株MM细胞系LP-1、OPM-2、RPMI 8226为研究对象,采用HEK细胞制备NEG及INPP4B的病毒上清,使用制备的病毒上清感染LP-1、OPM-2、RPMI 8226细胞,构建INPP4B过表达及NEG阴性对照MM细胞系。5.Western Blot法及qPCR法验证INPP4B过表达:分别采用Western Blot法及qPCR法验证经NEG及INPP4B病毒上清感染过的LP-1、OPM-2及RPMI 8226MM细胞系是否构建成功。6.CCK-8法检测LP-1、OPM-2及RPMI 8226细胞系过表达INPP4B后细胞增殖活力的变化:LP-1、OPM-2及RPMI 8226细胞系过表达INPP4B后,采用CCK-8的方法分别检测LP-1、OPM-2及RPMI 8226细胞系对照组、NEG组和INPP4B过表达组MM细胞增殖活力的变化。7.流式细胞术检测细胞周期的变化:LP-1、OPM-2及RPMI 8226细胞系过表达INPP4B后,采用细胞周期PI染色法检测INPP4B过表达后MM细胞周期是否变化。8.Western Blot法验证INPP4B过表达引起细胞增殖受限及细胞周期阻滞的机制研究:采用Western Blot的方法检测INPP4B过表达后LP-1、OPM-2及RPMI8226MM细胞系Akt、p-Akt的表达水平及细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达水平的变化。9.实验中所有数据均使用SPSS statistics 17.0统计软件进行统计学分析,P<0.05为差异具有统计学差异。实验结果相关作图采用Graph Pad Prism 5进行图形分析。结果:1.qPCR结果得出:以正常供者骨髓浆细胞为对照,28例初治MM患者磁珠分选所得骨髓恶性浆细胞中,2例初治MM患者中INPP4B的表达水平是增高的,26例患者恶性浆细胞中INPP4B的表达水平是降低的;取表达量的中位数为cut-off值,分别研究INPP4B的表达水平是否与患者预后相关,并经过SPSS统计学分析,证实INPP4B低表达预示患者不良预后,且具有统计学差异,PFS(P<0.05),OS(P<0.05)。2.免疫组化结果得出:42例髓外浆细胞瘤中,35例患者不表达INPP4B,7例患者局灶性表达INPP4B,分析INPP4B的表达与否与临床预后的相关关系,尽管有INPP4B表达的患者预后优于不表达者的相关趋势,但是无统计学差异(PFS及OS均>0.05)。3.qPCR结果得出:以正常供者骨髓浆细胞为对照,7种MM骨髓瘤细胞系中INPP4B的RNA表达水平均明显低于正常骨髓浆细胞中INPP4B的表达水平。4.Western Blot法及qPCR法验证INPP4B过表达实验结果得出:分别在RNA水平及蛋白水平上验证经病毒感染质粒的3种MM细胞株LP-1、OPM-2及RPMI 8226中INPP4B实现了过表达状态。5.细胞增殖CCK8实验结果得出:3种MM细胞株LP-1、OPM-2及RPMI 8226过表达INPP4B后,MM细胞生长增殖速率明显低于感染NEG阴性对照质粒组以及未处理组,且具有统计学意义(P<0.05)。6.流式检测细胞周期实验结果得出:3种MM细胞株LP-1、OPM-2及RPMI8226过表达INPP4B后,细胞周期检测相对于感染NEG质粒对照组,过表达INPP4B的MM细胞株细胞周期阻滞在G1期(P<0.05)。7.Western实验结果得出:3种MM细胞株LP-1、OPM-2及RPMI 8226过表达INPP4B后,Akt及Akt-p473表达水平无变化,Akt-p473蛋白表达水平下调,细胞周期调节蛋白Cyclin D1的表达下调。结论:与正常供者骨髓浆细胞相比,大部分MM初治患者骨髓标本恶性浆细胞中的INPP4B表达水平是下调的,且INPP4B的低表达预示患者不良预后。此外大部分髓外浆细胞瘤组织标本中INPP4B的表达水平也是减低的。7种MM细胞系中INPP4B的m RNA水平相对于正常供者骨髓浆细胞来说也是减低的。INPP4B过表达抑制MM细胞的增殖,且可能通过抑制PI3K/Akt信号通路来实现,主要是作用于p473-Akt位点;生长抑制作用可能通过下调Cyclin D1的表达进而引起G1期的细胞周期阻滞。