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骆驼蓬(Pegannum harmala L.)为疾藜科(Zygophllaceae)骆驼蓬属多年生草本旱生植物,广泛分布于中亚、北非和中东,在我国主要分布于西北干旱地区。骆驼蓬全草及种子均可入药,是重要的维药,主治关节骨痛、筋脉软弱、偏瘫健忘、神昏头痛、月经不调等症。目前,国内外学者对骆驼蓬种子的生物碱成分及其药理作用研究非常深入,而对非生物碱类化学成分及生物活性鲜有报道。本论文对骆驼蓬种子70%乙醇提取物酸化处理后,用氯仿萃取得到非生物碱类部分,综合利用硅胶柱色谱、ODS中压柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱以及制备型反相HPLC等各种色谱学手段,从骆驼蓬种子的非生物碱部位分离得到47个化合物。运用化学和现代波谱学手段,鉴定单体化合物的化学结构,分别为:(1)三萜萌类化合物:3β-acetoxy-27-(4-hydroxy-3-methoxy-E-cinnamoyloxy)lup-en-28-oic acid methyl ester(1*),3β-acetoxy-27-hydroxylup-20(29)-en-28-oic acid(2*),3-oxo-27-transcaffeoyloxylup-20(29)-en-28-oic acid methyl ester(3*),3α-acetoxy-14α-hydroxylup-20(29)-en-1 1-oxo-28-oic acid methyl ester(4*),3α-acetoxy-11α,14α-dihydroxylup-20(29)-en-16-oxo-28-oic acid methyl ester(5*),3-oxo-27-hydroxylup-20(29)-en-28-oic acid methyl ester(6),3-oxo-27-hydroxylup-20(29)-en-28-oic acid(7),methyl 1up-20(29)-en-3-oxo-28-oate(8),betulonic acid(9),lupeol(10),3α-acetoxy-27-hydroxylup-20(29)-en-28-oic acid methyl ester(11),3β-acetoxy-27-hydroxylup-20(29)-en-28-oic acid methyl ester(12),3α,27-dihydroxylup-20(29)-en-28-oic acid methyl ester(13),betulin(14),betulinic acid(15),3 α-acetoxy-27-hydroxyolean-12-en-1 1-oxo-28-oic acid methyl ester(16*),3α-hydroxy-27-(4-hydroxy-3-methoxy-E-cinnamoyloxy)olean-12-en-28-oic acid methyl ester(17*),3α-acetoxy-27-hydroxyolean-12-en-28-oic acid methyl ester(18),3β-acetoxy-27-hydroxyolean-12-en-28-oic acid methyl ester(19),3α-acetoxy-27hydroxyolean-12-en-28-oic acid(20*),3α-acetoxy oleanolic acid(21),3α,28-dihydroxy-12-en-olean(22),3β,28-dihydroxy-12-en-olean(23),3-oxo-27-hydroxyolean-12-en-28-oic methyl ester(24),3α-acetoxy-9α,11α,26-trihydroxy-olean-12-en-28-oic acid methyl ester(25),urs-12-ene-28-carboxy-3α-tetradecanoate(26),3α-acetoxy-12,27-dihydroxyolean-12-en-11-oxo-28-oic acid methyl ester(27),29-hydroxy-3-oxotirucalla-7,24diene-21-methyl ester(28),3β-acetyl-20S,24S-epoxy-25-hydroxydammarane(29)。(2)酚酸类化合物:4-hydroxybenzylcyanide(30),p-methoxybenzeneacetonitrile(31),syringylethanone(32),7-hydroxy-6-methoxy-3-(3-methyl-2-butenyl)coumarin(33),p-methoxybenzoic acid(34),N-(2-phenylethyl)acetamide(35)。(3)其他类化合物:cyclohexenone(36),dehydrovomifoliol(37),(E,4R)-4-hydroxy-4,5,5-trimethyl-3-(3-oxobut-l-enyl)cyclohex-2-enone(38),loliolide(39),cyclo(L)-Pro-(L)-Leu(40),cyclo-(S)-Pro-(R)-Phe(41),cyclo(D)-Pro-(D)-Val(42),cyclo(D)-Pro-(D)-Leu(43),proline(44),3,4-dimethyl-5-hydroxy-5-pentylfuran-2(5H)-one(45),pinoresinol(46),3’-O-demethylatedepiturpin(47)。分离鉴定的47个化合物,包括29个三萌类化合物(1-29),6个酚酸类化合物(30-35),12个其他类化合物(36-47)。其中化合物1-5、16、17、20为8个新化合物。本论文对从骆驼蓬种子中非生物碱部分分离得到的三萜类化合物进行了体外抗肿瘤活性测试。结果显示,化合物2、12、21对HeLa细胞(人宫颈癌细胞)、HepG2细胞(人肝癌细胞)和SGC-7901细胞(人胃癌细胞)等肿瘤细胞的增殖具有显著的抑制作用(IC50 8.29-17.58μM),化合物6、11、20和26对HeLa细胞、HepG2细胞、SGC-7901细胞的增殖也有较强的抑制作用(IC50 15.09-37.75μM)。为了进一步研究活性化合物对细胞增殖影响,我们采用了克隆形成实验测试化合物2、12和20对HeLa细胞增殖的影响。克隆形成实验结果表明,化合物2、12和20呈现浓度依赖性抑制细胞群落形成,随着化合物浓度的增加,细胞群落数明显减少。进一步通过Hoechst 33258染色荧光显微镜分析肿瘤细胞,发现该3个化合物可抑制HeLa细胞的生存能力,使HeLa细胞出现凋亡的形态特征。为了进一步验证细胞凋亡是否被触发,通过Western blot分析了凋亡相关蛋白表达水平。结果表明,化合物2、12、20能剂量依赖性增加PARP-1和BAX的表达,降低BCL-2的表达,提示HeLa细胞发生了凋亡。本研究为骆驼蓬种子的进一步开发利用提供了一定的研究基础和科学依据。