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青霉素是兽医临床上广泛使用的一类抗生素，一般采用乳房内注射的用药途径来治疗和预防奶牛的乳腺炎，而由此引起的牛奶中青霉素残留是一个全球性的问题。由于牛奶中青霉素残留对消费者健康的危害及青霉素耐药性菌株的产生，对牛奶中青霉素残留的检测和控制是目前世界各国政府所关注的问题。而目前我国对牛奶中青霉素残留检测的方法的灵敏度达不到我国对牛奶中青霉素残留的最高残留限量的要求，有必要对牛奶中青霉素残留的检测方法进行研究，以达到世界先进水平。 本论文主要研究了当前国外先进的牛奶中青霉素残留的检测方法，并建立牛奶中青霉素残留的微生物检测技术，且应用于我国的残留监控计划中去，推动我国牛奶中青霉素残留检测技术与国际接轨，保证国内牛奶安全和消费者的身体健康。 目前国外常用的牛奶中青霉素残留检测的微生物学检测方法有微生物抑制法、微生物受体法和酶比色法。微生物抑制法有嗜热脂肪芽胞杆菌纸片法、戴尔沃-p法、戴尔沃-p-多项测试法、CHARM抑制法、CHARM农场测试法、嗜热链球菌Valio T101法、亮黑还原法、藤黄微球菌法、三磷酸腺苷法、三碟法、六碟法等，而微生物受体法主要是CHARM Ⅱ法，酶比色法主要是Penzyme法。 本论文建立了嗜热脂肪芽胞杆菌纸片法和CHARM Ⅱ法，用于检测牛奶中的青霉素残留。CHARM Ⅱ法采用3H或14C标记的青霉素和牛奶中的青霉素残留在细菌表面的特异性受体位点进行竞争，样品经离心除去上清液，沉淀在闪烁液重新悬浮，用液体闪烁计数器来测量其放射性，然后将样品的放射性与判定点比较，样品的放射强度与样品中残留物的含量成反比。此法的检测限为2ppb，检测时间为15分钟。嗜热脂肪芽胞杆菌纸片采用嗜热脂肪芽胞杆菌作为测试菌株，培养温度为55±2℃，并对牛奶样品进行82±2℃加热处理，以去除牛奶中存在的干扰物质，方法的检测限为4ppb，检测时间为3-4小时，并采用青霉素酶法对青霉素残留进行初步确认。