奶牛乳房炎四种主要致病菌多重PCR检测方法的建立与应用

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:liongliong517
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奶牛乳房炎(Bovinemastitis,BM)是指奶牛乳腺受到物理、化学刺激,特别是微生物侵袭所引发的一种炎性变化。该病轻则导致奶牛产奶量和乳品质量的下降,重则使奶牛泌乳功能丧失,最终使患牛淘汰,给奶牛养殖业造成巨大的经济损失。金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌等致病菌是引起奶牛乳房炎的最主要的病原菌。本研究根据金黄色葡萄球菌的23SrRNA基因、大肠杆菌的phoA基因、无乳链球菌的16SrRNA基因、停乳链球菌的16SrRNA基因设计引物,构建多重PCR反应体系,并对其特异性、敏感性和临床实用性进行验证。试验结果表明本实验建立的多重PCR法具有良好的特异性和敏感性,金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌的特异条带大小,分别为895 bp、320 bp、575bp、466bp、敏感性依次为1 pg/μL、1pg/μL、100fg/μL、1 pg/μL。该方法能在6小时内准确诊断临床牛奶样品,与传统细菌分离培养方法相比,可节省大量的时间,具有良好的推广应用前景。
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