猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种对全球范围内的养猪业造成严重危害的病毒性传染病,其发病特征以育肥猪呼吸道症状、新生仔猪高死亡率以及母猪繁殖障碍为主。中国流行的PRRSV主要为Ⅱ型,即美洲型毒株。虽然疫苗免疫在一定程度上保护了猪群,但PRRSV易变异、毒株亚型众多,而且存在抗体依赖增强作用,导致疫苗免疫的临床效果并不理想。因此,研究开发新型抗PRRSV药物刻不容缓。桔梗,药用其根部,归肺经,有祛痰排脓,宣肺平喘的功效,是中医临床上治疗呼吸道疾病的知名药材。枯梗皂苷D(Platycodin D,PD)是枯梗中主要的皂苷成分,含量相对较髙(可达0.6%)。文献报道,PD具有抗肿瘤、降低胆固醇含量、抗炎平喘等作用,目前还未看到关于PD抑制PRRSV的研究报道。本文对PD体外抗PRRSV的活性进行了系统的评价,并初步探讨了其抗PRRSV作用机制。本论文利用间接免疫荧光的分析方法,从50余种五环三萜类化合物中筛选出具有显著抗PRRSV活性的化合物PD,在此基础上对PD开展了系统的药效评价。通过MTT法确定PD的细胞毒性,通过qRT-PCR的方法检测了PD对PRRSV-NSP9mRNA表达的影响,通过Western Blot和IFA检测了PD对PRRSV-N蛋白表达的影响,测定了PD在Marc-145细胞和PAMs细胞感染后48 h的抗PRRSV活性以及感染后72 h内不同时间点的药效。考察了PD对PRRSV的直接作用,PD在Marc-145细胞上对PRRSV复制周期中的吸附、内化、RNA复制和释放等不同阶段的抑制作用,以及PD对PRRSV感染诱导PAMs细胞过表达炎症因子TNF-α和IL-8 mRNA的影响。结果表明,感染后48 h,PD在1.25~5μg/mL的浓度范围显著抑制PRRSV在Marc-145细胞和PAMs细胞上的增殖,对三个不同亚型的PRRSV毒株均有效,且抑制作用呈剂量依赖关系。在PRRSV感染Marc-145细胞和PAMs细胞后12~72 h内的不同时间点,PD能有效抑制PRRSV的增殖。PD对PRRSV的吸附、内化、复制和释放过程有不同程度的抑制作用,而且PD能直接与PRRSV结合减弱病毒活力,但PD处理Marc-145细胞不能减弱细胞对病毒的易感性。此外,PD还能减少PRRSV感染诱导的PAMs细胞中炎症因子TNF-α和IL-8 mRNA的过表达,且呈剂量依赖性。本论文发现PD有良好的体外抗PRRSV活性。PD体外抗PRRSV的作用机制包括:与PRRSV结合减弱病毒活力,干扰PRRSV的吸附、内化、复制和释放等过程,降低由PRRSV感染引起的TNF-a和IL-8的过表达。