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背景与目的：细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-induced killer cells, CIK细胞)是从人外周血中采集分离的单核细胞在体外经多种细胞因子共培养后获得的一种兼具NK细胞和T细胞表型的异质细胞群。过继性回输自体细胞因子诱导的杀伤细胞,因其细胞活性强、抗瘤谱广,副作用较小等特点成为过继性细胞免疫治疗中应用最广泛的治疗方法。CIK细胞在体外杀伤非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)细胞的活性很明显,然而单独运用临床时却并未取得预期的疗效。大量研究发现,CIK细胞在肿瘤组织的归巢能力和异常的肿瘤微环境可能是影响CIK细胞治疗疗效的重要因素。近年来研究发现,抗肿瘤血管治疗可以抑制肿瘤血管的生长,同时参与调节肿瘤微环境。据此,我们推测抗血管治疗能够通过作用于NSCLC的微血管,使肿瘤局部微环境发生改变,继而增强CIK细胞对NSCLC的抑制作用。本研究旨在通过建立相关动物模型,探讨抗血管治疗联合CIK细胞对NSCLC的抑制作用及可能机制。材料与方法：1.建立BALB/c裸鼠A549、SPC-A1肺腺癌皮下移植瘤模型,随机分为4组：NS组(给予生理盐水,对照组)、BEV组(贝伐单抗单独治疗)、CIK组(CIK细胞单独治疗)、BEV+CIK组(贝伐单抗联合CIK细胞治疗)。贝伐单抗给药的剂量5mg/kg,尾静脉注射；CIK细胞每次回输的细胞密度约1×107/mL(每只回输0.1mL,细胞数约106个),尾静脉注射。贝伐单抗给药3天后回输CIK细胞。游标卡尺隔日测量并记录肿瘤长、短径,监测肿瘤体积变化并记录肿瘤生长曲线,观察各组治疗方案对肿瘤的抑制作用。2.建立A549肺腺癌裸鼠模型,给予贝伐单抗治疗24小时后,通过尾静脉注射Evans Blue,利用活体荧光显像方法观察贝伐单抗处理后肿瘤血管形态的改变。3.建立A549肺腺癌裸鼠模型,回输CFSE标记的CIK细胞至贝伐单抗或NS处理3天后的小鼠,利用流式细胞术观察各组荷瘤鼠肿瘤组织中CIK细胞的浸润比例。4.建立A549肺腺癌裸鼠模型,分离贝伐单抗或NS联合CIK细胞处理的小鼠的肿瘤组织,行CD3分子免疫组化染色观察各组肿瘤组织CD3+淋巴细胞的浸润比例。5.利用乏氧探针联合免疫组化检测肿瘤组织乏氧情况,荷A549肺腺癌裸鼠给予贝伐单抗联合CIK细胞治疗后,处死前4小时腹腔注射乏氧探针,分离肿瘤组织固定、石蜡包埋后连续切片(取相邻的切片)分别行乏氧和CD3分子免疫组化染色,研究乏氧与CIK细胞浸润的关系。结果：1.在A549肺腺癌肿瘤模型中, CIK组的肿瘤体积(968.52q-93.42mm3)与NS对照组(1158.51±81.18mm3)相比,抑制作用无明显统计学差异,p=0.185>0.05。BEV组(647.17±37.35mm3)与NS组相比,显示出明显的抑制肿瘤作用,具有统计学差异,p<0.05。而BEV+CIK组(441.46±18.92mm3)与BEV组相比,抑制作用无明显统计学差异,联合组的协同指数(EA=0.44,EB=0.16,EA+B=0.66,q-1.25>1.15)提示贝伐单抗联合CIK细胞具有协同抗肿瘤作用。在SPC-A1肺腺癌模型中,与NS对照组(3876.55+853.46mm3)、CIK组(3876.55+853.46)相比,BEV组(1877.73+539.93mm3)和BEV+CIK组(986.36±474.66mm3)可显著抑制肿瘤的生长,具有统计学意义,p<0.05。BEV+CIK组抑制作用与BEV相比无明显统计学差异,联合组的的协同指数(EA=0.51,EB=0.26, EA+B=0.74, q=1.17>1.15)提示贝伐单抗联合CIK细胞具有协同抗肿瘤作用。2.在A549肺腺癌模型中,活体荧光显像实验观察贝伐单抗治疗后的肿瘤血管,与对照组相比肿瘤血管的直径减小、分布更均匀,形态与结构趋于“正常”。3.在A549肺腺癌模型中,贝伐单抗处理后的肿瘤组织乏氧面积(9.23±5.5%)与生理盐水对照组(30.7±3.7%)相比明显减少(p<0.05),具有统计学差异。4.在A549肺腺癌模型中,非乏氧区域的CIK细胞浸润比例明显高于乏氧区域,提示乏氧限制CIK细胞在肿瘤组织中浸润。5.在A549肺腺癌模型中,贝伐单抗可以促进CIK细胞向肿瘤组织中的浸润。结论：1.贝伐单抗联合过继性回输CIK细胞治疗具有协同抑制NSCLC的作用。2.贝伐单抗能够通过诱导肿瘤血管“正常化”、改善肿瘤组织的乏氧,促进CIK细胞在NSCLC肿瘤组织中的浸润。