小肠是营养物质吸收的主要场所，小肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells，IEC)是肠道主要的功能细胞，参与肠道食糜的消化、吸收、免疫屏障和应激反应等，并与肠道的内、外分泌功能有密切关系。原代培养小肠上皮细胞费时费力，传代次数有限，在体外长期培养条件下，细胞生理功能容易变异，造成试验结果因细胞代数不同而难以比较。建立永生化小肠上皮细胞系，可以为研究肠道微生态营养和小肠上皮细胞的增殖分化提供重要的研究工具。本文旨在利用SV40T能促进细胞永生化的功能，构建含有SV40T基因的真核表达载体，将重组克隆转染小鼠小肠上皮细胞，进行小鼠小肠上皮细胞的永生化研究，为永生化小鼠小肠上皮细胞系的建立提供参考依据。 设计并构建pcDNA3(-)SVT真核表达载体。PVUII酶切改造pcDNA3真核表达载体，改造产物命名为pcDNA3(-)，XhoII酶切pGEM-LT，电泳胶回收得到SV40T基因片段，将其插入pcDNA3(-)真核表达载体，PSTI酶切连接产物，通过琼脂糖电泳筛选出插入方向正确的连接产物，并将其送生物公司测序。 探索小鼠小肠上皮细胞的分离纯化方法，得到纯度较高的小鼠小肠上皮细胞。以胎鼠小肠为材料，通过组织块培养法进行原代小鼠小肠上皮细胞的体外培养，采用刮除法和相差消化及相差贴壁法对细胞进行纯化，用0.05％ Trypsin-EDTA进行消化传代，通过形态学观察和免疫组织化学进行鉴定。 将SV40 T基因导入小鼠小肠上皮细胞，进行永生化研究。采用脂质体转染法，将编码SV40 T基因的真核表达载体pcDNA3(-)SVT导入经纯化的小鼠小肠上皮细胞，以pEGFP-N1为报告基因检测转染效率，通过PCR和RT-PCR检测SV40 T基因在小鼠小肠上皮细胞中成功表达。 结果表明：真核表达载体pcDNA3(-)SVT构建成功，为利用SV40 T抗原进行真核细胞永生化研究提供了稳定、可靠的分子工具。通过组织块培养法得到的小鼠小肠上皮细胞生长状况良好，增殖旺盛，经过纯化，得到了纯度较高的小鼠小肠上皮细胞，免疫组织化学鉴定为阳性。为小鼠小肠上皮细胞的永生化研究提供较好的细胞材料。PCR和RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳都检测到372bp的目的条带，表明SV40 T基因在小鼠小肠上皮细胞中成功表达，为永生化小鼠小肠上皮细胞系的建立奠定了基础。