【摘 要】
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目的1)研究甲状腺癌滤泡癌PD-L1表达水平2)探索PD-L1表达水平与甲状腺滤泡癌病理特征的关系;3)探索PD-L1对甲状腺滤泡癌细胞生物学特性的影响;4)探索甲状腺滤泡癌细胞中靶向调控PD-L1的microRNA;5)探索甲状腺滤泡癌细胞中miR-199a-5p对PD-L1的调控作用。方法1)收集我院2015-2020年确诊的甲状腺滤泡癌术后组织标本及随访资料;2)免疫组化法检测FTC癌组织中
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目的1)研究甲状腺癌滤泡癌PD-L1表达水平2)探索PD-L1表达水平与甲状腺滤泡癌病理特征的关系;3)探索PD-L1对甲状腺滤泡癌细胞生物学特性的影响;4)探索甲状腺滤泡癌细胞中靶向调控PD-L1的microRNA;5)探索甲状腺滤泡癌细胞中miR-199a-5p对PD-L1的调控作用。方法1)收集我院2015-2020年确诊的甲状腺滤泡癌术后组织标本及随访资料;2)免疫组化法检测FTC癌组织中PD-L1的表达水平;3)分析PD-L1表达水平与FTC病理特征的关系;4)通过qRT-PCR及Western blot检测FTC细胞及正常甲状腺滤泡上皮细胞中PD-L1的表达差异5)通过瞬时转染技术,沉默FTC细胞PD-L1基因的表达,并用qRT-PCR及Western blot验证沉默效果;6)通过CCK-8实验及Transwell迁移侵袭实验,探索沉默PD-L1对FTC细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响;7)探索沉默PD-L1对FTC细胞紧密连接蛋白表达的影响;8)通过信息生物学技术,寻找靶向调控PD-L1基因的microRNA,并选取保守结合位点的4个miRNA;9)通过qRT-PCR验证4个miRNA在FTC细胞及正常甲状腺滤泡上皮细胞中的表达差异,并筛选出在FTC中表达降低程度最大的miR-199a-5p;10)通过瞬时转染技术,敲低及过表达FTC细胞miR-199a-5p,并用qRT-PCR验证敲低及过表达效果;11)通过CCK-8实验及Transwell迁移侵袭实验,探索敲低及过表达miR-199a-5p对FTC细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响;12)通过qRT-PCR及Western blot检测FTC细胞敲低及过表达miR-199a-5p对PD-L1表达水平的影响;13)通过双荧光素酶基因报告检测验证PD-L1是miR-199a-5p直接靶向调控基因;14)qRT-PCR验证miR-199a-5p表达对Claudin-1及Occludin表达的影响。结果1)60例甲状腺滤泡癌患者中,癌组织PD-L1阳性表达率为63.33%（38/60）,癌旁细胞阳性表达率为11.67%（7/60）。PD-L1在癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P<0.05）;2)PD-L1的表达与肿瘤的最大径（是否>4cm）、甲状腺外浸润、血管侵犯、复发与否具有显著相关性（P<0.05）,而与患者的年龄、性别、肿瘤病灶数、淋巴结转移以及TNM分期无显著相关性（P>0.05）;3)与正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1相比,甲状腺滤泡癌FTC-133细胞系中PD-L1的表达明显增加（P<0.05）;4)沉默PD-L1基因表达后,FTC细胞增殖、迁移和侵袭能力明显降低（P<0.05）;5)沉默PD-L1可使FTC中Claudin-1表达量降低,Occludin表达量升高;6)与正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1相比,FTC细胞中miR-199a-5p的表达明显降低（P<0.05）;7)过表达miR-199a-5p可明显抑制FTC细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05）,且细胞中PD-L1的表达下降（P<0.05）,抑制miR-199a-5p表达,可以显著增强FTC细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05）,同时细胞中PD-L1表达明显升高;8)双荧光素酶报告基因检测验证了miR-199a-5p可直接靶向调控PD-L1基因的表达;9)miR-199a-5p靶向PD-L1影响Claudin-1及Occludin的表达。结论1)PD-L1甲状腺滤泡癌中有较高的表达水平;PD-L1表达与肿瘤侵袭性增加相关;2)PD-L1可促进甲状腺癌细胞增殖、迁移及侵袭;3)PD-L1可能通过影响紧密连接蛋白Claudin-1及Occludin的表达从而影响甲状腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力;4)miR-199a-5p可通过靶向PD-L1影响Claudin-1及Occludin的表达,调节甲状腺滤泡癌细胞的增殖、迁移侵袭能力。
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