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柑橘是在世界范围内种植面积最广、产量最大的重要的亚热带水果,但在柑橘种植、生产过程中存在一些严重问题,其中柑橘病害的广泛流行是影响柑橘产业的重要因素。1.柑橘黄龙病(HLB)是影响世界柑橘生产的最具毁灭性病害,目前我们对其致病机理还不太清楚。本文根据GenBank中提交的柑橘HLB亚洲型病原Serralysin蛋白基因序列,克隆了Serralysin蛋白N-端基因,命名为SerN;成功构建了含SerN基因的重组质粒pMD19-T-SerN,测序结果与GenBank中的原始序列100%同源；构建了重组表达载体pET24a-SerN,在E. coli中进行异源表达,通过Ni2+-NTA亲和柱纯化SerN蛋白,优化蛋白表达及纯化条件。2. SerN蛋白在不同表达菌株中进行表达,结果表明在E. coli pLysS中表达情况较好,经超声破碎以后SerN蛋白在上清与沉淀中均有表达,多数以包涵体形式存在；采用不同IPTG浓度诱导SerN蛋白表达,结果表明在IPTG浓度为0.05mM时SerN蛋白在上清中的表达量最高；不同的Binding buffer对SerN蛋白进行纯化,结果表明Binding buffer对SerN蛋白纯化效果的影响并不明显,对蛋白溶解性没有明显改观；咪唑梯度洗脱结果表明SerN蛋白与Ni2+-NTA柱亲和能力弱,在咪唑浓度为5mM即随杂蛋白一起洗脱；降低Binding buffer中盐浓度不能提高SerN蛋白的溶解性,PBS缓冲液中NaCl浓度为500mM时蛋白在上清中表达量明显高于其他情况。3.对来自不同柑橘产区的101个样品进行柑橘HLB的常规PCR检测和实时定量PCR(QPCR)检测,判断其是否感染柑橘HLB。其中常规PCR检测出4个疑似携带柑橘HLB的样品,而QPCR检测出28个疑似携带柑橘HLB的样品。比较这两种检测方法,发现QPCR检测灵敏度远高于常规PCR检测,这可能与待测植株病菌含量有关。4.本文克隆了柑橘衰退病(CTV)病原p23蛋白(GenBank登录号为AFD33289.1)基因,并构建了重组质粒pMD19-T-p23,测序结果与NCBI上已提交的序列进行比对,同源率为100%,说明成功克隆了CTV病原p23蛋白基因(p23),可作为之后CTV检测的正对照。对来自不同柑橘产区的81个样品进行CTV的RT-PCR检测,结果表明75个样品携带有CTV病毒,6个样品没有检测到CTV病毒。