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J亚群禽白血病是由J亚群禽白血病病毒(Subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)所引起的禽类造血组织中某些细胞成分过度增生的肿瘤性疾病。近些年来,ALV-J在我国本地鸡群中大规模流行,造成严重的经济损失。逆转录病毒感染宿主细胞的过程,首先是病毒囊膜蛋白与病毒细胞受体相互识别,发生相互作用,进而在受体介导下病毒进入宿主细胞。不同亚群的病毒,其细胞受体并不相同。据报道,禽Ⅰ型Na+/H+交换蛋白(Chicken Na+/H+exchanger typeⅠ,chNHE1)为J亚群禽白血病病毒的细胞受体。NHE1基因为看家基因,广泛存在于真核动物细胞膜上。在低pH条件下,ALV-J的囊膜蛋白与chNHE1识别,跨膜区(Transmembrane,TM)发生构象改变,促使囊膜蛋白与细胞膜融合,最终病毒进入细胞内。病毒与其受体的结合是病毒进入乃至感染过程的第一步,具有至关重要的作用。对于病毒与受体相互作用过程的研究,有利于探索病毒感染和致病机制。因而,本研究致力于探索ALV-J的细胞受体chNHE1的关键作用域及其在不同地方品种鸡之间的保守性。首先通过融合表达分泌信号肽的方式实现了gp85蛋白的高效可溶性表达,进而建立了检测受体结合能力的流式细胞分析方法。同时,构建并成功拯救了一株带有Luciferase标记、囊膜蛋白属于ALV-J的RCAS病毒,并利用此重组病毒建立了检测病毒进入水平的实验方法。在此基础性上,进行了chNHE1与人NHE1相应膜外环(Extracellular loop,ECL)及与无关标签HA的替换,通过受体结合实验和病毒进入实验,发现ECL1和ECL3为影响受体功能的关键膜外环。对ECL1进行逐级分段替换,证实了第28-39位氨基酸为影响受体功能的最小区段。对这一区段的12个氨基酸进行了点突变,最终确定30,33,34,38和39五个位点为影响受体功能的关键氨基酸位点。与此同时,通过对ECL3进行分段替换,确定了214/215两个位点协同作用,影响受体结合能力。为了进一步验证所鉴定关键氨基酸的重要作用,以人NHE1为骨架,替换为chNHE1上相应的氨基酸位点及区段。结果发现,第28-39区段能使人NHE1获得结合gp85蛋白能力。这一结果进一步证明了28-39位氨基酸是ch NHE1结合gp85蛋白的关键作用域。流行病学调查发现,不同地方品种鸡之间ALV-J感染率差异显著。为了验证这种差异是否是由于chNHE1作用域发生了变异,本研究从四个养禽大省选择了18个地方品种鸡,进行了chNHE1作用域的测序和比对,发现受体序列完全一致,高度保守。本研究首次鉴定了ALV-J的细胞受体chNHE1上发挥作用的关键区段和位点,并发现受体作用域在不同地方品种鸡中高度保守。这些结果为研究ALV-J感染与致病机制奠定了基础,为ALV-J防控策略的制定提供了新思路。