基于高通量测序探讨tsRNA在人增生性瘢痕成纤维细胞中的异常表达

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kk345
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目的:有研究证实tRNA衍生的小RNA(tsRNA)在许多生理和病理过程中均发挥重要的调节作用,然而它们在增生性瘢痕中的作用仍不清楚。本研究探讨tsRNA在人增生性瘢痕成纤维细胞中的差异表达,为进一步阐明其分子机制并寻找治疗新靶标提供新的思路和理论依据。方法:取烧伤、整形科增生性瘢痕手术患者瘢痕组织和邻近正常皮肤组织,并将其分为2份,一份经无菌处理后用于体外分离培养成纤维细胞,一份于-80℃超低温冰箱保存后期提取组织总RNA。采用酶消化法获得增生性瘢痕成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞,增生性瘢痕成纤维细胞为实验组,正常皮肤成纤维细胞为对照组。用Trizol一步法分别提取细胞总RNA并质检。随后用高通量测序获得增生性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞中存在的差异表达tsRNA和miRNA,并采用逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)验证体内外tsRNA的差异表达。随后通过GO分析、KEGG通路分析、靶基因的预测、共表达网络CNC和竞争性内源性RNA(ceRNA)网络等,来探讨这些差异表达的tsRNA的可能作用。结果:在增生性瘢痕成纤维细胞中共检测到67个差异表达的tsRNAs的可能作用,其中27个表达上调,40个表达下调。共检测到149个miRNA显著差异表达(倍数变化>2.0,P<0.05)。其中,120个miRNA表达上调,29个miRNA表达下调。GO分析显示这些失调的tsRNA与神经系统发育、细胞粘附、蛋白结合、血管生成和肌动蛋白结合等生物学功能有关。KEGG通路分析显示,差异表达的tsRNA参与Ras、Rap1和cGMP-PKG等信号通路。靶基因的预测同样表明tsRNA的靶基因与增生性瘢痕形成的几种重要的信号通路有关。RT-qPCR分别验证tsRNA在增生性瘢痕细胞和组织中的表达。miR-29b-1-5p作为tsRNA-23678的靶标,在增生性瘢痕成纤维细胞中表达下调,是瘢痕形成的负调控因子。此外,tsRNA-23761可充当ceRNA,与miR-3135b结合,以调节其靶标ACE的表达。结论:本研究揭示了tsRNA在人增生性瘢痕和正常皮肤成纤维中存在差异表达,与增生性瘢痕形成密切相关。为进一步明确其分子机制,治疗提供新的靶标和理论依据。
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