纳米级壳聚糖微球的制备与功能应用

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磁性高分子微球是近年来开始研究的一种新型功能材料,在磁性材料、生物医学、细胞学、生物工程等诸多领域内有广泛的应用前景。壳聚糖磁性微球由于其优良的生物相容性、高强的稳定性和无毒副作用等优点而深受关注。壳聚糖磁性微球的表面有丰富的活性基团,经过活化后可以负载多种功能分子(如酶、抗体、肽、DNA及RNA等)。可作为磁性功能载体,在酶的固定化、靶向药物、细胞分离和免疫测定等领域能够应用。基于上述背景,本论文旨在探索纳米级磁性微球的制备方法及其在生物分离中的应用。研究工作主要分为三个部分:1)纳米级磁性微球的制备及表面官能团修饰;2)磁性微球靶向性研究;3)磁性微球固定化RNA。1)采用共沉淀法制备纳米级Fe304磁流体,并对其用SDS进行表面改性。采用化学交联法,在分散有磁流体的壳聚糖溶液中,加入适量的戊二醛交联剂,制得内核为Fe3O4,外层包有壳聚糖的纳米级的磁性壳聚糖复合微球。确定了磁性壳聚糖微球的制备最佳工艺条件,并用电镜、红外光谱图、粒径分析仪等仪器对磁性壳聚糖微球的形态与组成特性进行分析。最后得出,用该方法制备的磁性壳聚糖微球95.4%集中在332.7nm左右,平均粒径为348.5nm,分散系数为0.283,且微球表面富含羟基、氨基和醇羟基等官能团,可与多种生物分子结合。2)通过研究磁性微球(MCM)的制作和动物的靶向实验,探索纳米级磁性壳聚糖微球的靶向性。本实验,将大鼠分为3组:组1为靶向组,组2为非靶向组,组3为空白对照组。通过原子吸收和红外光谱等方法检测各组大鼠体内靶向组织肝脏中铁离子含量。结果在组1的肝脏中铁离子含量明显高于其它组的肝脏。该结果表明,纳米级磁性壳聚糖微球具有良好的靶向性。3)通过浓盐法对啤酒酵母RNA进行提取,以磁性壳聚糖微球为载体,戊二醛交联法对RNA进行磁性固定化。通过比较反应体系中的无机磷和总磷量含量,对RNA的提取条件和固定化条件进行优化。啤酒酵母RNA提取实验结果中得知,RNA提取温度对提取率的影响最为显著;在提取时间为4h,提取温度为100℃,氯化钠质量分数为10%和啤酒酵母质量分数为8%的最优条件下,RNA提取率能够达到6.13%。RNA固定化研究中,以磁性壳聚糖微球为载体,以戊二醛交联法进行RNA固定化的最佳条件为,最佳固定化时间为4h;最佳固定化温度为40℃;固定化过程中RNA溶液最佳的添加量为30mL(浓度为2mg/mL)。
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