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骨形成蛋白15(bone morphogenetic protein-15,BMP15)是由卵母细胞分泌的一种生长因子。BMP15基因在卵母细胞中惟一表达,对早期卵泡生长和分化以及排卵起重要的调节作用。 本文的主要研究目标是基于比较基因组学方法和PCR技术,获得猪BMP15基因的编码区序列(coding sequence,CDS),并建立适宜的多态性检测方法。选择大白猪和梅山猪作为试验材料,根据人、小鼠和猪的BMP15基因设计并合成4对引物,进行基因组DNA的PCR扩增、克隆、测序,用BLAST软件进行DNA序列排列。结果如下: (1)获得包含猪BMP15基因外显子1(exon1)和外显子2(exon2)的全部编码区序列,并提交于GenBank,得到猪BMP15基因编码区序列的登录号分别为:AY283024、AY295073、AH012831、AY283025、AY295074、AH012830。 (2)用Pairwise BLAST软件,将大白猪BMP15基因编码区序列和梅山猪BMP15基因编码区序列进行比较,在外显子2区域发现了一个SNP位点,位于编码区第390个核苷酸处,大白猪为T,梅山猪为A,且该位点导致了限制型内切酶SpeⅠ酶切位点发生了改变。 (3)建立了猪BMP15基因基于内切酶SpeⅠ的PCR-RFLP多态性检测技术,对杜洛克(Duroc)猪、大白(Largewhite)猪、梅山(Meishan)猪进行PCR-RFLP检测,发现猪BMP15基因有三种基因型(BMP15AA、BMP15AB、BMP15BB)。 (4)利用PCR-RFLP技术,对杜洛克(Duroc)猪、大白Ⅰ(Largewhite)猪、大白Ⅱ(Largewhite)猪、长白(Landrace)猪、中国瘦肉新品系(DIV1系、DIV2系)猪、二花脸(Erhualian)猪、梅山猪(Meishan)BMP15基因位点进行分子扫描。结果表明,BMP15基因国内外品种间基因型频率和基因频率存在明显差异。 (5)运用SAS统计软件,对BMP15多态性与产仔数性状进行相关性分析,发现头胎产仔数(total number born of first parity,TNB of first parity)、头胎产活仔数(number born alive of first parity,NBA of first parity)、经产产仔数(TNB of later parities)、经产产活仔数(NBA of later parities)各品种间存在极显著的差异(p<0.01)。 对BMP15基因的克隆、测序及多态性研究有助于我们更深地了解该基因的真正功能,另外对猪育种及提高产仔数也有重要意义。