视网膜Müller细胞是视网膜中最主要的神经胶质细胞，它兼有少突和星形两种胶质细胞的特性，具有维护视网膜的正常结构、营养神经元、构成血-视网膜屏障、储存和缓冲K~+以及参与神经突触传递等多种生理功能。随着近年来对视网膜Müller细胞研究的深入，越来越多的研究表明，Müller细胞在视网膜疾病的病变过程中也起着重要的作用，例如机械损伤、光损伤、糖尿病性视网膜病变、视网膜缺血缺氧等均可引起Müller细胞发生一系列形态和功能的改变。因此，Müller细胞在视网膜疾病的病理过程中所起的作用也日益受到人们关注。本课题根据我室的前期工作，针对高能微波、次声等物理因子对视网膜Müller细胞的作用进行了初步探讨，这将为对其进行深入系统地研究提供一些新的实验依据。 第一部分 体外培养视网膜Müller细胞的方法建立 运用体外培养的方法对视网膜Müller细胞进行研究是一种非常有效的研究手段，体外培养研究具有细胞单纯、方法简便、易于控制实验条件等优点。但由于视网膜细胞成分复杂，且培养周期较长，要想快速获得单纯的Müller细胞并非易事。本实验首先采用ConA活化的脾细胞制备的条件培养液培养原代的视网膜Müller细胞，结果表明，脾细胞的条 硕士学位论文 物理因子对视网膜Muller细胞的影响 件培养液可以有效刺激原代培养的视网膜MUller细胞的生长，但其仍混 杂有神经元及其他细胞，传至3代后，即可获得较纯净的Milller细胞， 运用免疫细胞化学进行鉴定，GFAP阳性的Milller细胞可达95％以上。 为进一步简化培养过程，缩短实验周期，采用一步酶消化和一次性 过滤法结合简单的物理震荡法对原代的Muller细胞进行纯化，建立了一 种更加快捷有效的培养视网膜Milller细胞的纯化方法。运用这种方法， 从原代起即可获得比较纯净的视网膜MUller细胞。从而为后续实验打下 了基础。 第H部分 高功串徽波作用对视阉膜MUller细胞的彤响 在发达国家中，高功率微波（HPM）作为重要的新概念武器正在进 行研制，这值得我们密切关注。对HPM的生物学效应的研究已成为迫 在眉睫的课题。视觉系统是微波辐射的敏感器官之一。以往大量的流行 病学调查和实验室研究表明，微波可导致视网膜神经元变性、退化、坏 死，并且后极部视网膜可有小血管痉挛、小片出血、渗出等，从而导致 视觉功能障碍，但其损伤机理目前尚不清楚。为进一步探讨HPM对视 觉功能的作用机制，本实验对大功率、短时间的脉冲波对视网膜MUller 细胞的作用进行了观察。 本实验选择了9．3GHz，500MW微波源，以脉冲宽度ZI～22ns，重复 频率 0．lffe，作用于培养的视网膜 Muller细胞，共计作用 30个微波脉冲 的辐照。随后分别用＊y法测定对视网膜MUller细胞增殖力的影响， 用台盼蓝染液测定细胞死亡率，并且做了细胞的原位凋亡检测。结果表、明： 1．微波辐照组在实验后24h、96h、120h与对照组相比，其增殖力 有所下降32．用台盼蓝染色后，辐照组和对照组被着色的细胞均很少， 两组相比无显著性差异：3．TU’NE L原位凋亡检测显示微波辐照组有多 量细胞着色，而对照组仅有散在细胞着色。以上结果提示：在极短时间 的高功率脉冲波作用下即可对视网膜Muller细胞造成一定的损伤。 v t） 硕士学位论文 物理因子对视网膜Muler细胞的彤响 第三部分 缺氧对视网膜Milller细胞的彤响 缺氧是诱发视网膜血管病变的重要因素，可导致视网膜新生血管的 形成和一系列相关病理生理改变。以往的研究多侧重于视网膜血管内皮 细胞和色素上皮细胞对新生血管生成的作用及相关机制研究，而对视网 膜Milller细胞在这一病变过程中的作用及相应的机理研究较少。本研究 采用透射电镜和western blot方法对缺氧条件下培养的视网膜Muller细 胞进行观察研究，旨在探讨缺氧条件下视网膜Milller细胞超微结构的改 变及缺氧对神经胶质酸性蛋白（GFAP）和血管内皮细胞生长因子 （VEGF）表达的影响，并通过观察正常和缺氧情况下MUller细胞条件 培养基对视网膜血管内皮细胞增殖力的影响，来进一步阐明MUller细胞