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第一部分骨桥蛋白在炎症性肠病患者结肠组织中的表达背景:骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种分泌型磷酸化糖蛋白,在免疫性疾病的发病过程中起重要作用。近年来研究发现炎症性肠病(inflammatory boweldisease,IBD)患者血浆中OPN水平升高,在患者末端肠和结肠黏膜中发现OPN的表达。目的:了解OPN在IBD患者中的表达情况,探讨OPN在IBD发病过程中的作用。方法:用免疫组化半定量方法检测OPN在53例溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,UC)、62例克罗恩病(Crohn’s disease,CD)和15例结肠腺瘤患者结肠组织中的表达。结果:OPN在结肠上皮细胞和固有层渗出细胞中均有表达。UC组(11.84±0.98)和CD组(10.04±1.37)结肠上皮细胞中OPN的平均光密度均低于结肠腺瘤组(12.64±1.45)(p＜0.05),UC组中结肠上皮细胞中OPN的表达高于CD组(p＜0.001)。UC组(20.31±4.50%)和CD组(12.69±3.06%)结肠固有层渗出细胞中OPN阳性表达率的表达均高于(p＜0.001)结肠腺瘤组(3.85±0.66%)(p＜0.001),UC组结肠固有层渗出细胞中OPN的表达高于CD组(p＜0.001)。结论:OPN在IBD患者结肠黏膜中表达,来源不同的OPN在IBD中的作用不同。结肠上皮细胞中OPN表达下调可能与肠黏膜屏障受损有关,而在受损结肠渗出细胞中的表达增加则可能与免疫反应有关。第二部分右旋葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎中骨桥蛋白的变化背景:OPN在Th1免疫免疫反应早期就有高水平的表达,OPN在IBD患者结肠固有层细胞单核细胞中表达增加。目的:观察右旋葡聚糖硫酸钠(Dextran Sodium Sulfate,DSS)诱导的小鼠结肠炎模型中OPN的变化,探讨OPN介导的免疫反应在IBD发病机制中所发挥的作用。方法:64只雄性BALB/c小鼠随机分为A～H组:对照组(A组和E组)、UC模型组(B组和F组)以及柳氮磺吡啶(salazosulfapyridine,SASP)治疗组(C组和G组)和英夫利西治疗组(D组和H组)。A组和E组小鼠分别给予蒸馏水饮用23天和37天。B～D组和F～H组小鼠5%DSS溶液连续饮用9天,产生急性期结肠炎模型,第10天开始以2.5%DSS溶液维持2周;F～H组小鼠第24天开始给予给予蒸馏水饮用2周。B组和F组不给任何治疗;C组和G组小鼠于造模第10天开始给予SASP进行干预治疗,时间分别为2周和4周;D组和H组小鼠于造模第10天开始给予英夫利西单抗进行干预治疗,时间分别为2周和4周。观察指标包括小鼠一般情况、体重和结肠长度变化,行HE(hematoxylin and eosinstain,HE)染色以确定结肠病理组织学变化程度。用酶联免疫法(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)检测小鼠血浆中OPN的含量,用免疫组化法检测OPN在结肠组织中定位表达情况,用蛋白质印记法(Western blot,WB)和逆转录聚合酶联反应法(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)分别检测小鼠结肠组织中蛋白质水平和mRNA水平OPN的表达情况。结果:同对照组小鼠相比,UC模型组小鼠出现明显的结肠炎表现,主要表现为一般情况差、腹泻和便血、体重增长缓慢(p＜0.05)、结肠长度明显变短(p＜0.05)以及HE染色病理组织学评分明显升高(p＜0.05)。SASP和英夫利西单抗治疗后,与UC模型组小鼠相比,一般状况好转,腹泻和便血症状逐渐消失,体重增长,病理组织学评分下降。ELISA、免疫组化半定量、WB和RT-PCR等各种检测均提示,UC模型组小鼠OPN的表达比对照组明显增高(均p＜0.05),SASP治疗组和英夫利西治疗组OPN的表达均较UC模型组下降(p＜0.05),SASP治疗组和英夫利西治疗组OPN的表达无统计学差异。结论:OPN介导的免疫反应促进了DSS诱导的小鼠结肠炎的发生。经药物治疗后,DSS诱导的小鼠结肠炎炎症程度减轻,OPN的表达降低。第三部分OPN和Th1/Th2类细胞因子在DSS诱导的小鼠结肠炎模型中的变化背景:OPN是Th1型免疫反应的重要的调节因子。OPN在IBD患者表达增加。IBD患者存在Th1/Th2细胞因子的平衡漂移。目的:探讨OPN与Th1/Th2细胞因子的表达在IBD发病中的作用。方法:造模及干预方法同第二部分。分别用ELISA法和RT-PCR法检测DSS诱导的小鼠结肠炎模型治疗前后OPN和各种细胞因子的变化。结果:OPN检测结果同第二部分。ELISA法检测了小鼠血浆中TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-6和工L-10的浓度。UC模型组小鼠血浆TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-6和IL-10水平均较对照组明显增高(均p＜0.05),SASP和英夫利西干预治疗后TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-6较治疗前降低,其中TNF-α在治疗2周时降低有明显统计学差异(p＜0.05),IFN-γ和IL-6在治疗4周时降低有明显统计学差异(p＜0.05)。而IL-10水平较治疗前升高,尤其是治疗4周时升高有明显统计学差异(p＜0.05)。RT-PCR检测了小鼠结肠组织中TNF-α、IL-1β和IFN-γ表达情况。UC模型组结肠组织中TNF-α、IL-1β和IFN-γ的表达较对照组明显增高(p＜0.05),SASP和英夫利西干预治疗后TNF-α、IL-1β和IFN-γ表达降低,但无统计学差异(p＞0.05)结论:OPN可促进Th1型细胞因子而抑制Th2型细胞因子的表达,对IBD时Th1/Th2细胞因子的平衡漂移起着重要的调节作用。